التغيرات الشكلية في البكتيريا باستخدام المجهر الفلوري للخلايا الحية

Abstract

المصدر: برزوزوفسكي، ر. س. وآخرون. المجهر الفلوري للخلايا الحية لدراسة مواقع البروتينات تحت الخلية وتغيرات شكل الخلايا في البكتيريا. J. Vis. Exp. (2019)

يعرض هذا الفيديو مجهر فلورة الخلايا الحية لرؤية التغيرات الشكلية في الوقت الحقيقي للبكتيريا. يوضح الخطوات المتضمنة في التصوير، واكتساب التايم لابس، وفك الالتفاف للحصول على صور عالية الدقة في الوقت الحقيقي.

Protocol

1. التصوير

1. في يوم التجربة، شغل نظام المجهر. ابدأ برنامج التصوير (انظر جدول المواد) بالنقر على الأيقونة المناسبة على سطح المكتب. قم بتهيئة المجهر بالنقر على خيار تهيئة المجهر (الزر الموضح مع المجهر) في مربع حوار بدء التشغيل في البرنامج. تأكد من أن الهدف منخفض بالكامل باستخدام ضبط المجهر الخشن قبل التهيئة.
   ملاحظة: بعد التهيئة السريعة، يجب أن تظهر ثلاثة مربعات حوار إضافية بالإضافة إلى قائمة ابدأ: resolve3D، جمع البيانات، ومراقب التصفيات.
2. ضع قطرة زيت بمقدار 1.517 (معامل الانكسار) على هدف الغمر بالزيت بمقدار 100x الذي زودته الشركة المصنعة (الفتحة الرقمية = 1.4، مسافة العمل = 0.12 مم؛ انظر جدول ا....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
أغاروز	كواشف فيشر الحيوية	BP160-100	درجة علم الأحياء الجزيئي - معدل تقوية الأثر المنخفض
FM4-64	إنفيتروجين	T3166	المجهر
طبق زجاجي قاع	ماتيك	P35G-1.5-14-C	المجهر
المجهر	GE	دلتا فيجن إيليت	حامل مجهر معكوس مخصص من نوع أوليمبوس IX-71؛ برج إضاءة مخصص ووحدة إضاءة مرسلة. الأهداف: بلابون 60X (1.42 م، WD 0.15 مم); OLY 100X OIL (N.A. 1.4، WD 0.12 مم)؛ منشور DIC Nomarski لهدف 100X؛ كاميرا CoolSnap HQ2؛ SSI تجميع 7 ألوان؛ غرفة التحكم البيئي - معتمة.
PC190723	ميليبورسيغما	3445805MG	مثبط FtsZ
سوفت ووركس	GE		برامج التصوير الموردة من الشركة المصنعة