الكشف عن مسببات الأمراض المنقولة بالغذاء باستخدام PCR من عينات الذباب المخصبة

الملخص

المصدر: بافا-ريبول وآخرون. اكتشاف مسببات الأمراض البكتيرية المنقولة عن طريق الغذاء من ذباب القذر الفردي. J. Vis. Exp. (2015)

يوضح هذا الفيديو طريقة تعتمد على PCR تقوم بتضخيم الحمض النووي البكتيري المستهدف من عينات الذباب المخصبة باستخدام أقراص خاصة بمسببات الأمراض، مما يتيح الكشف في الوقت الحقيقي عن الفلورة وتحليل منحنى الذوبان لتأكيد وجود مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الغذاء في الحشرات الفردية.

البروتوكول

1. تفاعل بوليميراز المتسلسل (PCR) - أقراص جاهزة

1. اختر كتلة تبريد PCR مبردة (4 درجات مئوية) وضع رف أنابيب PCR فوق الإدخال.
2. ضع أنابيب PCR المقابلة التي تحتوي على أقراص جاهزة لعلاج PCR (المرفقة مع كل مجموعة) للمسبب الممرض المنقول بالغذاء المستهدف في الحامل، وفقا لملف الرف.
3. باستخدام أداة التفريغ، قم بإزالة الأغطية بعناية من أنابيب PCR. تخلص من الأغطية وتحقق من أن كل أنبوب يحتوي على جهاز لوحي.
4. نقل 50 ميكرولتر ( للسالمونيلا والكرونوباكتير) أو 30 ميكرولتر ( للسيلونوسيتوجينات) من اللايزات إلى أنابيب PCR محددة. استخدم أغطية بصرية جديدة وثبتها بإحكام على أنابيب PCR باستخدام أداة التغطية.
   ملاحظة: بعد إضافة الليزات إلى أقراص جاهزة ل PCR، يجب أن تبقى العينات مبردة عند 2 - 8 درجات مئوية حتى يتم تحميلها في نظام الكشف المعتمد على PCR. يمكن طرد أنابيب PCR عند 2,500 × g لبضع ثوان لضمان أن الحجم الكامل يكون في أسفل الأنبوب.
5. تحميل أنابيب PCR في جهاز جهاز الدورة/نظام الكشف عن PCR عن طريق فتح درج الأجهزة.
6. ضع رف أنابيب PCR في الآبار داخل الدرج وتأكد من أن الأنابيب موضوعة بشكل صحيح.
7. أغلق الدرج وبدأ البرنامج كما هو موصوف في بروتوكول الشركة المصنعة.
   ملاحظة: الجهاز المعتمد على PCR يحتوي على معايير دورة محددة مسبقا لكل ممرض ينتقل عبر الغذاء.
8. تحقق من أن شريط حالة دورة PCR يعرض شريطا أزرق يشير إلى أن جزء التضخيم من البرنامج يعمل.
   ملاحظة: بالنسبة لاختبارات PCR القياسية، يستغرق وقت معالجة البرنامج الكامل (التضخيم والكشف) حوالي 3 إلى 3.5 ساعات لإكماله.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
أداة التغطية	دوبونت	D11677028
أداة إزالة المفاتيح	دوبونت	D11134095
حامل أنبوب PCR	دوبونت	D12701663
ملقط دقيق ورأس مستقيم	بايوكويب	4731	قم بالتعقيم قبل الاستخدام. عدة موردين.
كتلة التبريد			عدة موردين.
الطرد المركزي			عدة موردين.