طريقة زجاجية مغطاة بغرف لتكوين الأغشية الحيوية البكتيرية في المختبر

الملخص

المصدر: بودوين، ت.، وآخرون. تصور تأثيرات البلغم على تطور الأغشية الحيوية باستخدام نموذج زجاجي مغطى بغرفة. J. Vis. Exp. (2016)

يوضح هذا الفيديو استخدام زجاج غطاء مغرف لدراسة تأثير عوامل البلغم المستخرجة من المريض على تطور الأغشية الحيوية البكتيرية.

البروتوكول

تم تنفيذ جميع الإجراءات المتعلقة بجمع العينات وفقا لإرشادات معهد جمع العينات (IRB).

1. طريقة الزجاج الغطاء المحجرة لتكوين الأغشية الحيوية
   1. نزرع عزلة بكتيرية ذات أهمية خلال الليل في وسط مرغوب عند 37 درجة مئوية مع الرج (200 دورة في الدقيقة).
      ملاحظة: تم استخدام عدد من البكتيريا المختلفة، بما في ذلك العزلات السريرية مثل سودوموناس إيروجينوزا، المكورات العنقودية الذهبية، مركب بوركهولدريا سيباسيا ، وأكروموباكتر زيلوسوكسيدان. يعتمد اختيار الوسط على السلالات والظروف المطلوبة، ومع ذلك يمكن استخدام وسط LB (مرق لوريا) في التجارب الأولية.
   2. من الزراعة الليلية، ضع 40 ميكرولتر من الزراعة في 4 مل من وسط طازج ونمت لمدة 3-4 ساعات عند 37 درجة مئوية مع الرج (200 دورة في الدقيقة) للحصول على مزرعة بكثافة بصرية تبلغ 600 نانومتر (OD600) تقريبا بين 0.5-0.6.
   3. قم بتخفيف الزراعة من الخطوة 1.2 إلى 1/5 في الوسط المرغوب باستخدام ترشيح بلغم بنسبة 10٪ أو بدون ترشيح بلغم (كعنصر تحكم). يمكن اختبار تركيزات أخرى من ترشيح البلغم (أي 50٪ أو 100٪).
   4. استخدم 200 ميكرولتر من التخفيف لزرع آبار غرف الانزلاق.
   5. دع البكتيريا تلتصق لمدة 4 ساعات عند درجة حرارة 37 درجة مئوية دون أن تهتز.
   6. بعد 4 ساعات، أزل الوسط واغسل الطبقة الحيوية بلطف بمادة جديدة واحدة. استبدلها بوسائط جديدة بسعة 200 ميكرولتر.
      ملاحظة: لدراسة تأثيرات البلغم على الغشاء الحيوي، يجب أن يحتوي الوسط الطازج على فائض بلغم.
   7. اترك الأغشية الحيوية تنمو للفترة المطلوبة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية دون هز، واستبدال الوسائط كل 12 ساعة، دون غسل حتى وقت المجهر.
      ملاحظة: لدراسة تأثير السوبرنيترات البلغم على قابلية المضادات الحيوية للغشاء الحيوي، تضاف المضادات الحيوية إلى الوسط بعد 24 ساعة من نمو الأغشية الحيوية، ويتم الاحتفاظ بها في الأوساط حتى تلوين وتصوير الأغشية الحيوية.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
زجاج غطاء Lab-Tek II بغرفة، #1.5 بوروسيليكات، 8 آبار	ثيرمو سيشر ساينتيفك	155409
مطعم ميلرز LB Broth	ثيرمو فيشر العلمي	12780-052	وسائط قياسية للنمو الليلي/نمو الأغشية الحيوية