التصوير الكونفوكلي للأغشية الحيوية البكتيرية الناتجة عن البلغم يترشح من مرضى التليف الكيسي

الملخص

المصدر: بودوين، ت.، وآخرون. تصور تأثيرات البلغم على تطور الأغشية الحيوية باستخدام نموذج زجاجي مغطى بغرفة. J. Vis. Exp. (2016)

يوضح هذا الفيديو طريقة في المختبر لتقييم كيف يؤثر البلغم الناتج عن التليف الكيسي المستخرج من المريض على تكوين الأغشية الحيوية البكتيرية. باستخدام شرائح الحجرة، والتلوين الفلوري، والمجهر الكونفوكي، يكشف عن زيادة السماكة، وتغيير الهيكل، والكتلة الحيوية الأعلى في الأغشية الحيوية المزروعة بالبلغم، مما يبرز دور مكونات المضيف في تشكيل تطور الأغشية الحيوية.

البروتوكول

تم تنفيذ جميع الإجراءات المتعلقة بجمع العينات وفقا لإرشادات معهد جمع العينات (IRB).

صبغ الأغشية الحيوية والمجهر الكونفوكال

1. بعد فترة النمو المطلوبة (24-48 ساعة هي الأفضل)، أزل الوسائط من آبار الحجرة وغسل كل غرفة بلطف مرتين بسعة 300 ميكرولتر من PBS المعقم.
2. تحضير خليط التلوين للبيوغميل عن طريق خلط 1 ميكرولتر من كل صبغة (المرفقة في مجموعة الصلاحية) لكل مل من المحلول المطلوب. اصنع صبغة بالماء أو محلول الوسط.

ملاحظة: يوصى بالماء من قبل الشركة المصنعة.

3. أضف 200 ميكرولتر من خليط الصبغة إلى كل بئر من الزجاج المغلف بغرفة، وحضن في درجة حرارة الغرفة، في الظلام لمدة 45 دقيقة.
4. أزل خليط التلوين من الحجرات واغسل كل بئر ب 300 ميكرولتر من PBS المعقم. قم بإزالة PBS واستبدله بماء عذب أو وسط وسط.
5. تابع تصوير الأغشية الحيوية عبر المجهر الكونفوكلي.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
زجاج غطاء Lab-Tek II بغرفة، #1.5 بوروسيليكات، 8 آبار	ثيرمو سيشر ساينتيفك	155409
مجموعة Viabilty لفيلم Filmtracer Biofilm Live/Dead	ثيرمو فيشر العلمي	L10316
مطعم ميلرز LB Broth	ثيرمو فيشر العلمي	12780-052	وسائط قياسية لنمو الغاوث/الغشاء الحيوي الليلي
محلول ملحي مخزن بالفوسفات (Dulbecco A)	أكسويد	BR0014G	غسل غرف الغشاء الحيوي بعد إزالة الوسائط
زايس أكسيوفيرت 200 متر	كارل زايس