مراقبة استعمار البكتيريا لجذور الأرابيدوبسيس ثاليانا في نظام خالي من التربة

الملخص

المصدر: هاريس، س. ل. وآخرون. مراقبة استعمار البكتيريا والحفاظ على جذور الأرابيدوبسيس ثاليانا في نظام الزراعة المائية العائمة. J. Vis. Exp. (2019)

يوضح هذا الفيديو بروتوكولا لمراقبة استعمار البكتيريا المرتبطة بالجذر على شتلات الأرابيدوبسيس ثاليانا المزروعة في نظام بلا تربة. بعد الاستعمار، يتم إزاحة البكتيريا عن طريق التصويب، ثم تخفيفها، وتطلأها، وتحتضنها لتشكيل مستعمرات تعكس ارتباط البكتيريا وقابليتها للبقاء على قيد الحياة.

البروتوكول

جمع البكتيريا لعدد الخلايا الصالح

ملاحظة: يمكن تحديد عدد البكتيريا لكل جذر شتلة في أي نقطة زمنية للحضانة. يمكن مراقبة الاستعمار بين 0 ساعة و18 ساعة، بينما يمكن مراقبة الصيانة من الساعة 18 فصاعدا.

1. أزل الشتلات من الشبكة (الشكل 1، الخطوة 5). ضع ملقط معقم باللهب بلطف تحت الأوراق (ولكن على جانب الورقة من الشبكة)، واقرص الساق برفق. حرك الشتلات للأعلى وبعيدا عن الشبكة لإزاحة الجذر دون كسره. إذا انكسر الجذر، قم بكشط أسفل الشبكة بلطف لجمع الطول الكامل.
2. قم بإزالة البكتيريا من جذور النباتات. انقل البكتيريا إلى آبار في صفيحة تحتوي على 24 بئر تحتوي على 1 مل من ddH_2.0. قم بسونيك العينات.
3. قم بقياس كمية البكتيريا على الجذور.
   1. إجراء تخفيف تسلسلي بمقدار 10 مرات للعينات الصوتية حتى تخفيف ^10-6 في وسط نمو البكتيريا. أضف 50 ميكرولتر من كل تخفيف إلى صفائح الأجار الفردية وافرد بحبيبات زجاجية معقمة. حضن الصفائح عند درجة الحرارة المثلى للبكتيريا حتى تصبح المستعمرات الفردية قابلة للعد.

النتائج

الشكل 1: اختبار استعمار وصيانة البكتيريا على جذور A. thaliana . تم نقل شتلات A. thaliana التي نمت على شبكة بلاستيكية معقمة إلى وسط نمو محسن للبكتيريا [هنا، 0.1 x lbb (مرق لوريا) Lennox]. ثم استعمرت البكتيريا الجذر لمدة 18 ساعة بين...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
ألواح ذات 24 بئر	بي دي فالكون	1801343
اللهب
الملقط
الحاضنة			عند درجة حرارة مثالية لنمو بكتيريا محددة
المياه المعقمة
الموجات فوق الصوتية
ملحق 24 شوكة للموجات فوق الصوتية			لصوت عدة عينات في نفس الوقت. يمكن القيام بذلك بشكل فردي
خرز الزجاج
متعدد الأضواء/الريبيتر
ألواح معقمة ذات 96 بئر			للتخفيف التسلسلي. يمكن استبدالها بأنابيب إيبندورف
بذور الأرابيدوبسيس ثاليانا			نوصي بمركز الموارد البيولوجية أرابيدوبسيس لمخزون البذور
Pseudomonas simiae WCS417r