تبييض الصبغات الزرقاء الفوتوبكتيرية لتصوير البروتينات المنظمة للنمو

الملخص

المصدر: زان، ي.، وآخرون. يتيح التبييض الضوئي التصوير فائق الدقة لحلقة FtsZ في بكتيريا الزرقاء بروكلوروكوكوس. J. Vis. Exp. (2018).

يوضح هذا الفيديو إجراء تبييض الصبغات الضوئية في الخلايا الزرقاء باستخدام ضوء الزينون تحت ظروف باردة لتحسين تصوير الفلورة للبروتينات المنظمة للنمو.

البروتوكول

1. التبييض الضوئي لأصباغ الكلوروفيل في خطوة حجب

1. انقل غطاء الغطاء إلى طبق التلوين. أضف 50 ميكرولتر من محلول الحاجب، الذي يحتوي على 0.2٪ (v/v) منظف غير أيوني-100 و3٪ (v/v) سيروم ماعز، فوق غطاء الغطاء.
2. ضع لوح التلوين بالكامل على الثلج وحركه تحت مصدر ضوء الزينون للتبييض الضوئي لمدة لا تقل عن 60 دقيقة، مع شدة ضوء تبلغ 1,800 ميكرومول فوتون/متر²·ثانية.
3. بعد التبييض الضوئي والحجز، قم بإزالة حاجز العزل بعناية عن طريق امتصاصه بحافة منشفة ورقية.
   ملاحظة: شدة ضوء الزينون عالية جدا لدرجة أن النظارات الشمسية المناسبة ضرورية لحماية العين. وفي الوقت نفسه، لف مصدر الضوء واللوحة بورق ألمنيوم لتجنب تسرب الضوء، مما قد يسبب ضررا للعين. تحقق من غطاء الغطاء كل 15 دقيقة للتأكد من بقائها رطبة. إذا كان جافا، أضف 50 ميكرولتر من حاجز الحاجز.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
جسيمات البوليسترين	سفيروتيك	PP-20-10	2.0-2.4 ميكرومتر
غطاء الغطاء	مارينفيلد	111580	18 مم ∅، السماكة رقم 1
الإيثانول	شارلاو	ET00021000
هيدروبروميد بولي-إل-ليسين	سيغما-ألدرتش	P9155	مول وزن 70,000-150,000
بارافورمالديهايد	سيغما-ألدرتش	158127
محلول غلوتارالديهايد، 50٪	سيغما-ألدرتش	340855
PBS	سيغما	P3813
ترايتون X-100	سيغما	T8787
ملح EDTA ثنائي الصوديوم، 2-هيدرات	تكنولوجيا الذهب الحيوية	E-210-500
قاعدة تريزما	سيغما	T1503
ليسوزيم	سيغما	L6876
مصل الماعز	سيغما	G9023
مصدر ضوء XD-300 زينون			250 واط