تأسيس العدوى البكتيرية في يرقات ذبابة الفاكهة

الملخص

المصدر: هيروياسو، أ.، د وآخرون، استخراج الخلايا الدموية من يرقات ذبابة الفاكهة الميلانوغاستر لإجراء العدوى الميكروبية وتحليلها. J. Vis. Exp. (2018)

يوضح هذا الفيديو عملية إثبات العدوى البكتيرية في يرقات ذبابة الفاكهة عن طريق وضعها في قطرة بكتيرية ووخزها بإبرة التنجستن. ثم تحضن اليرقات على صفيحة أجار مثقبة غنية بالمغذيات لدراسة التفاعلات بين المضيف والممرض.

البروتوكول

1. عدوى في الجسم الحي

1. سخن طبق عصير الفاكهة ذبابة الفاكهة في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة.
   1. أضف 30 جرام من الأجار إلى 700 مل من الماء وقم بتعقيم المحلول لمدة 40 دقيقة.
   2. قم بإذابة 0.5 جرام من بارابين الميثيل في 10 مل من الإيثانول المطلق.
   3. أضف محلول بارابين الميثيل إلى 300 مل من مركز عصير الفاكهة.
   4. اخلط بسرعة مركز العصير في محلول الأجار المعقم ووزع 5 مل في 10 × أطباق بترى بحجم 35 مم.
   5. بعد أن تبرد الألواح لمدة 15 دقيقة، خزنها عند 4 درجات مئوية.
2. جهز يرقات المرحلة الثالثة.
3. ضع معجون الخميرة على طبق أجار. قم بعمل قطع دقيق في صفيحة الأجار حيث يمكن لليرقات الهجرة لتجنب الجفاف (الشكل 1A). قم بتجميع إبرة تنجستن مدببة بقطر 0.001 مم مع ملقط تثبيت باستخدام فيلم البارافين (الشكل 1B، C).
4. بيبت 50 ميكرولتر من مزرعة الكبريت عالية القياس (5.95×10⁹ جيرانيلا/مل) على فيلم البرافين تحت المجهر الستيريو ووضع اليرقات في بركة البكتيريا.
5. ضع اليرقات في بركة البكتيريا، وخزها بإبرة التنجستن (الشكل 3D)، وانقلها إلى صفيحة أجار (الشكل 1E).
6. انقل الوسط الممرض المتبقي إلى صفيحة الأجار وأغلق اللوحة بطبقة بارافين.
7. احتفظ باليرقات على الصفيحة في الهواء الرطب حتى الوقت المطلوب بعد العدوى (الشكل 1F). في هذه التجربة، تبقى اليرقات المصابة ب C. burnetii على اللوحة لمدة 24 ساعة.

النتائج

الشكل 1: عدوى في الجسم الحي. أ) تستخدم أطباق عصير الفاكهة ذبابة الفاكهة ومعجون الخميرة لحضانة اليرقات المصابة في الجسم الحي . تجرى قطع في صفيحة الأجار لتسهيل طول عمر اليرقات (الأسهم الرمادية). ب) إبرة تنجستن مدب...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
المجهر الستيريو	أمسكوب	SM-1BSZ-L6W
الملقط	VWR	82027-402
كوكسييلا بورنيتي - mCherry	الدكتور هاينزن، ر.
أطباق عصير الفاكهة ذبابة الفاكهة	بروتوكولات كولد سبرينغ هاربور		http://cshprotocols.cshlp.org/content/2007/9/pdb.rec11113.full
أغار	كواشف فيشر الحيوية	BP1423-500
ميثيل بارابين	أمريسكو	0572-500G
الإيثانول المطلق	كواشف فيشر الحيوية	BP2818-500
مركز ويلش 100٪ عصير عنب مجمد، 340 مل	أمازون	B0025UJVGM
أطباق بتري، 10 × 35 مم	فيشر ساينتيفك	08-757-100A
الخميرة، الخبازات المجففة نشطة	MP Biomedicals	210140001	أضف جزئين من الماء إلى جزء واحد من الخميرة (v/v)
إبرة التنغستن	أدوات العلوم الدقيقة	10130-20
ملقط التثبيت	VWR	HS8313
الليستيريا مونوسيتوجينس	ATCC	السلالة: 10403S	تم زراعة سلالة ليستريا مونوسيتوجينس 10403S (بيشوب وهينريشس، 1987) في مرق ديفكو للدماغ والقلب (BHI) (BD Biosciences) يحتوي على 50 ميكروغرام/مل ستريبتوميسين عند درجة حرارة 30 درجة مئوية.