تصوير كونفوكال عالي الدقة لخلايا ذبابة الفاكهة المصابة بمسببات الأمراض

الملخص

المصدر: هيروياسو، أ.، وآخرون. استخراج الخلايا الدموية من يرقات ذبابة الفاكهة الميلانوغاستر لإجراء العدوى الميكروبية وتحليلها. J. Vis. Exp. (2018)

يعرض هذا الفيديو تصويرا كونفوكاليا عالي الدقة لخلايا الدم الميلانوغاستر من ذبابة الفاكهة المصابة بكوكسييلا بورنيتي لتصوير موقع الممرض ثلاثي الأبعاد، مما يتيح تحليلا تفصيليا لديناميكيات العدوى داخل الخلايا وتفاعلات المضيف مع الممرض.

البروتوكول

1. التصوير الكونفوكالي
   1. قم بتكوين المجهر الكونفوكالي للتصوير بثلاثة ألوان ل DAPI (4',6-Diamidino-2-phenylindole)، EGFP (بروتين فلوري أخضر معزز)، وmCherry. استخدم الإعداد التالي: إثارة DAPI (مثال) 405 نانومتر، الانبعاث (EM) 415-480 نانومتر؛ EGFP سابقا 488 نانومتر، EM 493-564 نانومتر؛ mCherry ex 587 نانومتر، EM 597-700 نانومتر.
   2. ضع العينة على المجهر وركز عليها باستخدام هدف فتحة عدسة عددية (NA) بحجم 63X/1.4. حدد موقع الخلايا الدموية المرغوبة في مجال الرؤية للتصوير.
   3. قم بضبط قوة الليزر وكسب الكاشف لتحقيق التعريض المناسب للعينة. تحقق من عدة مستويات z للتأكد من أن مستوى التعريض مناسب لسمك العينة بالكامل.
   4. ابحث عن المواقع العلوية والسفلية على محور z لخلية دموية كاملة. اضبط هذه المواقع كمواقع بداية ونهاية لتقسيم z.
   5. استخدم فقط تكبير المسح لتصوير المنطقة التي تحتوي على الخلية الدموية. غالبا ما تستخدم عوامل زووم 3X.
   6. اجمع سلسلة الصور بدقة مناسبة مثل 1024 × 1024 بكسل في مستوى x-y، وتباعد 0.3 ميكرومتر في بعد z.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
كوكسييلا بورنيتي - mCherry	الدكتور هاينزن، ر.
زجاج الغلاف المجهر	فيشر ساينتيفك	12-545-80
4',6-دياميدينو-2-فينيليندول	ثيرمو فيشر العلمي	62247
الميكروسوبي الكونفوكال	لايكا	مجهر الليزر الكونفوكال TCS SP8-X الأبيض الضوئي
شرائح المجهر	فيشر ساينتيفك	12-552-3