مقالة منهجية

تحليل خلية واحدة للتعبير الجيني من مسببات الأمراض المستخرجة من النباتات

مارس 31, 2026

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: روفيان، ج. س. وآخرون. تحليل خلية واحدة لتعبير جينات Pseudomonas syringae داخل نسيج النبات. J. Vis. Exp. (2022).

يوضح هذا الفيديو طريقة لتحليل تعبير الجينات في البكتيريا الممرضة المستخرجة من النباتات على مستوى الخلية المفردة باستخدام عامل نسخ مميز بالفلورية. يكشف التصوير الكونفوكالي عن عدم تجانس في تعبير جينات الضراوة، مما يبرز التنوع الوظيفي داخل مجموعة بكتيرية مستنسخة.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. تحليل خلية واحدة للبكتيريا المستخرجة من الأبوبلاست

  1. حضر محلول أجاروز بنسبة 1.5٪ في ماء مقطر. بعد الذوبان، أضف كمية كافية من الحجم لملء الفراغ بين شريحتين مجهريتين موضوعتين جنبا إلى جنب وضع شريحة أخرى فوقها (الشكل 1). اتركها تجف لمدة 15 دقيقة ثم أزل الشريحة الموضوعة على الأعلى. باستخدام شفرة، اقطع وسادة الأغاروز إلى قطع بحجم 5 مم × 5 مم قبل الاستخدام مباشرة.
  2. بالتوازي، يتم طرد المركزي بمقدار 1 مل من البكتيريا المستخرجة من الأبوبلاست بدرجة حرارة 12,000 × جرام لمدة دقيقة واحدة في درجة حرارة الغرفة، ثم إزالة المادة الفائقة بعناية باستخدام ماصة، ثم أعد تعليق الحبيبات في 20 ميكرولتر من الماء لتركيز الخلايا. ضع قطرة 2 ميكرولتر من الخلايا المركزة على غطاء بحجم 0.17 مم وغط القطرة بقطعة 5 مم × 5 مم من وسادة الأغاروز التي تم الحصول عليها سابقا في الخطوة 1، كما هو موضح في الشكل 1.
  3. تصور تحضير البكتيريا تحت المجهر الكونفوكي (انظر جدول المواد). لتحديد البكتيريا الفلورية الخضراء، استخدم ليزر الإثارة عند 488 نانومتر ومرشح انبعاث يتراوح من 500 نانومتر إلى 550 نانومتر. لتحديد جميع البكتيريا، استخدم الحقل الساطع وادمج الحقلين.
  4. معالجة الصور الكونفوكالية باستخدام فيجي (انظر جدول المواد). للقيام بذلك، استخدم إضافة MicrobeJ لتحديد شكل الخلية البكتيرية وقياس شدة الفلورة داخلها.
    ملاحظة: يوصى بالحصول على صورة من بكتيريا معزولة (غير مجمعة) لهذا التحليل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
24521_figure_1.jpg

الشكل 1: تمثيل تخطيطي لإعداد وتحضير لوحة الأغار.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
غطاء منزلق 0.17 مم  لا توجد متطلبات خاصة
شبكة معدنية 1.6 × 1.6 ممبوزيفو شبكة شاشة من الألياف الزجاجية
أنابيب مخروطية بحجم 50 ملسارستيدت  
أغاروزميرك  
المجهر الكونفوكلي ستيلاريسلايكا مايكروسيستمز  
برمجيات فيجي   

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة