يعرض هذا الفيديو نموذجا لمضيف وميكروب في الأمعاء في المختبرات لدراسة فعالية البكتيريا. يتم حضن زراعة مشتركة لخلايا Caco-2 وHT29-MTX مع بكتيريا معالجة مسبقا في ظروف هضمية محاكاة. يتم تقييم سلامة حاجز الظهارة باستخدام مقاومة كهربائية عبر الظهارة، وتجمع كسور من الوسط، والمخاط المذاب، وتحليل الخلايا المحللة، والحطام الخلوي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نموذج الأمعاء في المختبر لتقييم التصاق البكتيريا واستبطانها
397 مشاهدة
⸱
مارس 31, 2026
في هذه المقالة
الملخص
البروتوكول
1. السلالات وظروف الزراعة
ملاحظة: تكونت مجتمع الفم الصناعي من سلالات شائعة في الميكروبيوم الفمومي.
- احصل على السلالات التالية من مجموعة الزراعة النوعية الأمريكية (ATCC): Aggregatibacter actinomycetemcomitans (ATCC 43718)، Fusobacterium nucleatum (ATCC 10953)، Porphyromonas gingivalis (ATCC 33277)، Prevotella intermedia (ATCC 25611)، Streptococcus mutans (ATCC 25175)، Streptococcus sobrinus (ATCC 33478)، Actinomyces naeslundii (ATCC 51655)، المكورات العقدية الغوردونية (ATCC 49818)، أكتينومايسيس فيسكوزوس (ATCC 15987)، والتها....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| السلالات | |||
| Aggregatibacter actinomycetemcomitans | مجموعة ثقافة الأنواع الأمريكية | ATCC 43718 | |
| نواة فوسوباكتيريوم | مجموعة ثقافة الأنواع الأمريكية | ATCC 10953 | |
| بورفيروموناس جينجيفاليس | مجموعة ثقافة الأنواع الأمريكية | ATCC 33277 | |
| بريفوتيلا إنترميديا | مجموعة ثقافة الأنواع الأمريكية | ATCC 25611 | |
| المكورات العقدية المتحولة | مجموعة ثقافة الأنواع الأمريكية | ATCC 25175 | |
| المكورات العقدية الصاخبة | مجموعة ثقافة الأنواع الأمريكية | ATCC 33478 | |
| أكتينومايسيس فيسكوزوس | مجموعة ثقافة الأنواع الأمريكية | ATCC 15987 | |
| المكورات العقدية اللعابية TOVE-R | |||
| التهاب المكورات العقدية | مجموعة ثقافة الأنواع الأمريكية | ATCC 49456 | |
| المكورات العقدية الساغوينيس | مجموعة بكتيريا BCCM/LMG | LMG 14657 | |
| Veillonella parvula | معهد لايبنيتس DSMZ - مجموعة الكائنات الدقيقة وزراعة الخلايا الألمانية | DSM 2007 | |
| المكورات العقدية العقدية | مجموعة ثقافة الأنواع الأمريكية | ATCC 49818 | |
| خطوط الخلايا | |||
| خلايا كاكو-2 | المجموعة الأوروبية لزراعة الخلايا المعتمدة | 86010202 | |
| خلايا HT29-MTX | المجموعة الأوروبية لزراعة الخلايا المعتمدة | 12040401 | |
| المواد الكيميائية والمستهلكات | |||
| مرق حقن القلب الدماغي (BHI) | أكسويد | CM1135 | |
| بلود آجار 2 | أكسويد | CM0055 | وسط بلود آجار |
| ميناديوني | سيغما | M9429 | |
| همين | سيغما | H9039 | |
| 5٪ دم حصان معقم مزيل الدماغ | مختبرات E&O المحدودة، | P030 | |
| مجموعة InnuPREP PCRpure | أناليتيك ينا | 845-KS-5010250 | مجموعة تنقية PCR |
| بيغ داي | أنظمة حيوية تطبيقية | 4337454 | صبغة للتسلسل |
| مجموعة تسلسل الدورة ABI Prism BigDye Terminator v3.1 | أنظمة حيوية تطبيقية | 4337456 | |
| SYBR Green I | إنفيتروجين | S7585 | |
| يوديد البربيديوم | إنفيتروجين | P1304MP | |
| قوارير زراعة T25 غير مغطى، معالجة بزراعة الخلايا أو تهوية أو معقمة | VWR | 734-2311 | |
| حل تريبسين-إيدتا | سيغما-ألدرتش | T3924-100ML | |
| محلول تريبان بلو 0.4٪، سائل، مصفى بالتصفية | سيغما-ألدرتش | T8154 | |
| محلول الفوسفات المخزن (PBS) | جيبكو | 14190250 | |
| وسائط زراعة خلايا DMEM، مع GlutaMAX وPyruvate | تقنيات الحياة | 31966-047 | |
| إدخالات زراعة خلايا الغشاء البوليستر من كورنينغ ترانسويل | سيغما-ألدرتش | CLS3450-24EA | |
| المخاطين من معدة الخنزير من النوع الثاني | سيغما-ألدرتش | M2378 | |
| مصل البقر الجنيني المعطل | جرينر بيو ون | 758093 | |
| مضاد حيوي-مضاد للفطريات (100X) | جيبكو | 15240062 | |
| ترايتون X 100 لعلم الأحياء الجزيئي | سيغما-ألدرتش | T8787 | |
| DPBS بدون كالسيوم، المغنيسيوم | جيبكو | 14190-250 | |
| مجموعة اختبار السمية الخلوية من بيرس LDH | ثيرمو فيشر العلمي | 88953 | |
| بئر Corning HTS Transwell-24، حجم المسام 0.4 ميكرومتر | شركة كورنينج كوستار | 3450 | |
| مياه خالية من النوكلياز | الرحلان الكهربائي السيرفي | 28539010 | |
| المعدات | |||
| غرفة عد نويباور محسنة | كارل روث | T729.1 | |
| مقياس تدفق BD Accuri C6 | بكالوريوس العلوم الحيوية | 653118 | |
| باورلايزر 24 هوموجينايزر | موبيو | 13155 | |
| T100 Thermal Cycler | بيوراد | 186-1096 | |
| نظام التدفق | صنع حسب الطلب | - | |
| جهاز هزاز الحاضنة InnOva 4080 | نيو برونزويك العلمي | 8261-30-1007 | شاكر ل 2.10 |
| حاضنة CO₂ ميميرت | شركة ميميرت GmbH & Co. | ICO150med | |
| نظام المقاومة الكهربائية (Millicell ERS) | EMD ميليبور، ميرك KGaA | MERS00002 | |
| ميليبور ميلي-كيو الأكاديمي، نظام مياه فائقة النقاء | ميليبور، ميرك KGaA | - | |
| شاكر (أساسي ROCKER 3D) | إيكا | 4000000 | شاكر ل 6.10 |
