تنقية أجسام الإنتاسوم للفيروس الرغوي النموذجي بواسطة كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي

الملخص

المصدر: Mackler, R. M., et al. تجميع وتنقية الإنتاسومات الخاصة بالفيروس الرغوي النموذجي. J. Vis. Exp. (2018)

يوضح هذا الفيديو عملية تنقية الإنتازومات (intasomes) الخاصة بالفيروس الرغوي النموذجي (PFV) من معلق مختلط من البروتين والحمض النووي (DNA) باستخدام استخلاص الملح وكروماطوغرافيا استبعاد الحجم، مما ينتج عنه معقدات نشطة للتحليلات اللاحقة.

البروتوكول

1. إذابة الإنتاسوم

1. قم بتحضير طرفي ماصة واسعي التجويف عن طريق إزالة 2-4 مم من طرف ماصة سعة 20 µL باستخدام شفرة حلاقة أو مشرط جديد على سطح نظيف.
   ملاحظة: ستُستخدم هذه الأطراف في الخطوتين 1.3 و1.5.
2. أخرج أنبوب الديلزة من محلول الديلزة. ولمنع تخفيف عينة الإنتاسوم بمحلول الديلزة الذي قد يتبقى في نهاية الأنبوب بالقرب من المشبك، استخدم ماصة دقيقة ذات طرف صغير لإزالة أي محلول ديلزة زائد. ثم قم بإزالة المشبك من أحد طرفي أنبوب الديلزة.
3. استخدم طرف ماصة واسع التجويف من الخطوة 1.1 لنقل العينة، بما في ذلك الراسب الموجود داخل أنبوب الديلزة، إلى أنبوب سعة 1.5-mL على الثلج. 
   ملاحظة: يبلغ الحجم الإجمالي للمادة المستع....

النتائج

الشكل 1: كروماتوغرام استبعاد الحجم. تم فصل تجمع intasome لفيروس PFV باستخدام عمود SEC من الأغاروز. يتيح هذا العمود فصل التجمعات (1)، وintasome PFV الذي يتكون من رباعي من PFV IN وقطعتين من vDNA (2)، وPFV IN أحادي القيمة وvDNA (3). شمل هذا المثال.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
أوليغومرات DNA	IDT	N/A	أوليغومرات DNA مخصصة
NaCl	P212121	RP-S23020
BIS-TRIS propane,>=9.0% (titration)	Sigma-Aldrich	B675-50G
جلسرول	Thermo Fisher Scientific	G37-20
رؤوس ماصات تحميل الهلام، 1 - 20 μL	Corning	CLS4853-40EA
شفرة حلاقة؛ أحادية الحافة؛ 10/عبوة؛ عبوة من 10 قطعة	Fisher Scientific	12-640
مشابك أنابيب الديلزة	Spectrum Labs	132734
أنابيب ديلزة 6-8 kDa 10 mm	Spectrum Medical	132645
Superose 6 10/30 GL	GE Healthcare Life Sciences	17517201