يوضح هذا الفيديو عملية توصيل الجينات بوساطة الفيروس المرتبط بالغدة (AAV) في سِقالة كبد جرذ مأنسن. يقوم الناقل بتوصيل جين خارجي يشفر لبروتين تقرير فلوري وحمض نووي ريبوزي مُسكت للجينات إلى خلايا الكبد عبر عملية الإدخال الخلوي بوساطة المستقبلات. ويدعم هذا النموذج عملية ترنسدكشن فعالة في نظام أنسجة كبد ثلاثي الأبعاد يتم ترويته.
مقالة منهجية
نقل الجينات إلى كبد جرذ مأنسن باستخدام ناقلات الفيروس المرتبط بالغدة* (AAV)*
42 مشاهدة
⸱
أغسطس 31, 2026
في هذه المقالة
الملخص
البروتوكول
تنحي نموذج الكبد
- اضبط محلول ناقل الفيروس المرتبط بالغدة (AAV) ليصل إلى تركيز نهائي قدره 2.7 x 1013 جينوم ناقل في 5 ml عن طريق إضافة الحجم المناسب من المحلول الملحي المنظم بالفوسفات (PBS).
- افصل الكبد عن دائرة الوسط عن طريق إزالة الأنابيب من الكانيولا. صِل حقنة سعة 5 ml بكانيولا الوريد البابي واحقن كامل محلول ناقل AAV (5 ml).
- ملاحظة: يمكن إضافة الفينول الأحمر (5 µg/ml) اختيارياً لتتبع توزيع محلول ناقل AAV في جميع أنحاء الكبد.
- قم بالتحضين لمدة 1 hr دون ضخ. زد معدل التدفق تدريجياً، بدءاً من 1.25 ml/min لمدة 10 min، ثم 2.5 ml/min لمدة 20 min، ثم 3.75 ml/min لمدة 30 min. استزرع كبد الجرذ المعاد استزراعه بالخلايا على مدار 6 أيام.
- ملاحظة: استبدل ثلث الوسط بوسط جديد (50 ml) كل يومين. خذ عينات من وسط الاستزراع لقياس المعايير الفسيولوجية، مثل نشاط لاكتات ديهايدروجينيز، والـ pH لعينات الوسط، وتركيز الجلوكوز واللاكتات.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| حضّانة | Fraunhofer | / | |
| مضخة تمعجية | Fraunhofer | / | |
| شفة ذات أخدود | Duran | 2439454 | |
| حلقة دائرية شفافة | Duran | 2922551 | |
| مشبك تحرير سريع | Duran | 2907151 | |
| غطاء شفة مسطح | Duran | 2429857 | |
| أنبوب ذو لولبة | Duran | 2483802 | |
| أنبوب ذو لولبة | Duran | 2483602 | |
| حلقة سد سيليكونية | Duran | 2862012 | |
| غطاء لولبي | Duran | 2924013 | |
| غطاء لولبي | Duran | 2924008 | |
| غطاء لولبي بفتحة | Duran | 2922709 | |
| غطاء لولبي بفتحة | Duran | 2922705 | |
| مرشح | Sarstedt | 831,826,001 | |
| أنابيب سيليكون | VWR | 228-1500 | |
| موصل أنابيب | Ismatec | ISM556A | |
| أنابيب متوافقة حيوياً | Ismatec | SC0736 | |
| دوارق زراعة T175 | Greiner bio-one | 660 160 | |
| RPMI 1640 | BioWest SAS (Th. Geyer) | L0501-500 | |
| جلوتامين | BioWest SAS (Th. Geyer) | X0551-100 | |
| تريبسين | BioWest SAS (Th. Geyer) | L0940-100 | |
| بنسلين/ستريبتومايسين | BioWest SAS (Th. Geyer) | L0022-100 | |
| مصل عجل جنيني | cc pro | S-10-M | |
| HepG2 | DSMZ | ACC 180 |
الوسوم
