تصوير وتقدير حجم فيروس Faustovirus باستخدام المجهر الإلكتروني

الملخص

المصدر: Bou Khalil, J. Y., et al. استراتيجية سريعة لعزل فيروسات Faustoviruses جديدة من عينات بيئية باستخدام Vermamoeba vermiformis. J. Vis. Exp. (2016).

يوضح هذا الفيديو تصوير جزيئات فيروس Faustovirus من مزرعة أميبا مصابة باستخدام المجهر الإلكتروني النافذ. ويتناول الفيديو تحضير الشبكة، والتصبيغ السلبي باستخدام موليبدات الأمونيوم لتعزيز التباين، ورؤية الفيروس تحت المجهر. وينتهي البروتوكول بقياس حجم Faustovirus باستخدام أدوات البرمجيات المدمجة في المجهر.

البروتوكول

1. المجهر الإلكتروني
   1. بعد تحديد الهوية الأولي على الشرائح، قم بتقييم وجود الفيروس العملاق من خلال فحص مزارع السائل الطافي بواسطة المجهر الإلكتروني.
   2. ضع 5 µl من العينة الإيجابية على الشبكة المعالجة بالتفريغ المتوهج. انتظر لمدة 20 دقيقة تقريبًا في درجة حرارة الغرفة.
   3. جفف الشبكة بعناية وضع عليها قطرة صغيرة من موليبدات الأمونيوم بتركيز 1% لمدة 10 sec. اترك الشبكة لتجف لمدة 5 min.
   4. ابدأ الفحص بالمجهر الإلكتروني عند 200 keV.
   5. ضع الشبكة في الحامل؛ ثم أدخل الحامل في المجهر. تحقق من نظرة عامة على التفريغ بالنقر على الأيقونة المقابلة. أغلق الصمامات وابدأ الفحص عند حجم بقعة 5، وتكبير x 25,000.
   6. قم بقياس الفيروس العملاق باستخدام برنامج ImageJ أو مباشرة عبر المجهر باستخدام أداة القياس الموجودة في شاشة الحصول على الصور.
      ملاحظة: تُصنف العينة ضمن مجموعة Faustovirus إذا كان حجم القفيصة حوالي 200 nm.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
سلالة الأميبا CDC-19	ATCC	France	50237
أطباق	Cellstar	France	655180
مرشحات تعمل بالتفريغ	Thermo scientific	France	BPV4550 / 20170115
محلول ملحي منظم بالفوسفات	Thermo Fisher scientific	France	10010-023
صبغة DAPI	Life Technologies	France	D1306
شبكات كربونية	Euromedex	France	FCF400NI
موليبدات الأمونيوم	VWR internationanl	France	21276185
دوارق	SARSTEDT	Germany	833911
مرشحات 0.22 μm	Milex millipor	France	SE2M229104
جهاز طرد مركزي فائق Sorval WX 80	Thermo scientific	France	9102448
مرشحات التدفق السريع	Nalgene	France	450-0020