تصوير الجسيمات النانوية لفيروس التهاب الكبد E بواسطة المجهر الإلكتروني النافذ

الملخص

المصدر: Chen, C. C., et al. الوظيفية السطحية لجسيمات فيروس التهاب الكبد E النانوية باستخدام طرق الاقتران الكيميائي. J. Vis. Exp. (2018)

يوضح هذا الفيديو كيفية تحضير الجسيمات النانوية الشبيهة بفيروس التهاب الكبد E وصبغها سلباً من أجل تصورها باستخدام المجهر الإلكتروني النافذ. وتبرز هذه الطريقة السلامة التركيبية للجزيئات ذات الغلاف البروتيني فقط والمتجمعة ذاتياً، مما يؤكد تماثلها ونقاوتها من خلال التصوير عالي الدقة.

البروتوكول

1. رصد الجسيمات النانوية لفيروس التهاب الكبد E (HEVNPs) باستخدام المجهر الإلكتروني النافذ (TEM)
   1. قم بتحضير أو تخفيف عينات HEVNP لتصل إلى 0.5 - 2 mg/mL باستخدام 10 mM من حمض 2-(N-morpholino)ethanesulfonic (MES) بـ pH 6.2 من أجل التصوير بـ TEM.
   2. قم بتأيين الشبكات المطلية بالكربون باستخدام تفريغ التوهج (glow discharge) بقوة 40 mA لمدة 30 s لإنتاج سطح كربوني محب للماء. تم وصف جهاز تفريغ التوهج في جدول المواد.
      ملاحظة: يمكن للسطح الكربوني المحب للماء في الشبكات أن يدوم لمدة 30 min فقط بعد معالجة تفريغ التوهج.
   3. أمسك الشبكة بملقط وأضف 2 µL من عينة HEVNP إلى الشبكة، وانتظر لمدة 15 - 30 s، ثم جففها باستخدام ورق ترشيح.
   4. اغسل الشبكة فوراً باستخدام ddH₂0 وجففها بورق ترشيح.
   5. أضف فوراً 2 µL من uranyl acetate بتركيز 2% إلى الشبكة، وانتظر 15 s، ثم جففها بورق ترشيح. جفف شبكات العينات بوضعها في خزانة تجفيف إلكترونية مزيلة للرطوبة طوال الليل.
   6. انقل الشبكة إلى جهاز TEM وقم بالتصوير بتكبير يتراوح بين 10-80k. تظهر HEVNPs في TEM كبروتينات عشرونية الوجوه فارغة يبلغ قطرها ~27 nm، وذلك بسبب غياب RNA الفيروسي.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
هيدرات MES	شركة Sigma-Aldrich Chemical Co	M8250-250G	حمض 2-(N-مورفولينو) إيثان سلفونيك (MES)
جهاز التفريغ التوهجي EMS	علوم المجهر الإلكتروني		جهاز التفريغ التوهجي