كيف محاريب والخلايا الجذعية خلال نموذج التنمية هو السؤال المهم مع الآثار العملية. في ذبابة الفاكهة المبيض ، والخلايا الجذعية الجرثومية الخط والشكل الجسدي مطلبهم خلال نمو اليرقات. هذا الفيديو يوضح كيفية تشريح ، وصمة عار وجبل المناسل الإناث من طور مرحلي third المتأخرة (LL3) ذبابة الفاكهة اليرقات.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
العديد من الأجهزة تعتمد على الخلايا الجذعية من أجل تنميتها وخلال مرحلة التطور الجنيني للصيانة أو ترميم خلال فترة البلوغ. فهم كيفية تشكل الخلايا الجذعية ، وكيفية تفاعلها مع بيئتها ، من الأهمية بمكان لفهم التنمية ، التوازن والمرض. وقد عمل المبيض من melanogaster ذبابة الفاكهة ذبابة الفاكهة نموذجا للتفاعل مؤثر من الخلايا الجذعية الجرثومية خط (GSCs) مع دعم خلاياهم الجسدية (المتخصصة) 1 ، 2. وقد أتاح الموقع معروف من مكانة وGSCs ، ويقترن بالقدرة على معالجة وراثيا لهم والباحثين لتوضيح مجموعة متنوعة من التفاعلات بين الخلايا الجذعية ومطلبهم 12/03.
على الرغم من ثروة من المعلومات حول آليات مراقبة وصيانة GSC التمايز ، لا يعرف إلا القليل نسبيا حول كيفية GSCs مطلبهم والجسدية خلال نموذج التنمية. حوالي 18 محاريب الجسدية ، والتي تشمل المكونات الخلوية وخلايا شعيرات محطة كاب (الشكل 1) ، وشكل خلال طور مرحلي اليرقات third 13-17. GSCs تنشأ من خلايا جرثومية بدائية (PGCs). PGCs تتكاثر في مراحل اليرقات في وقت مبكر ، ولكن في أعقاب تشكيل مجموعة فرعية متخصصة ليصبح PGCs GSCs 7 ، 16 ، 18 ، 19. معا ، فإن الخلايا الجسدية وGSCs المتخصصة في جعل وحدة وظيفية التي تنتج البيض طوال فترة حياة الكائن الحي.
أسئلة كثيرة فيما يتعلق بتشكيل وحدة GSC تبقى دون جواب. وأفضل مثل عمليات التنسيق بين الخلايا السليفة للمحاريب والسلائف الخلايا الجذعية ، أو جيل من التباين داخل PGCs عندما تصبح GSCs ، يمكن دراستها في اليرقة. ومع ذلك ، دراسة منهجية للتنمية المبيض اليرقات يمثل تحديا جسديا. الأولى ، هي المبايض اليرقات الصغيرة. حتى في مراحل اليرقات أواخر هم فقط عبر 100μm. بالإضافة إلى ذلك ، المبيضين وشفافة هي جزء لا يتجزأ من الدهون في الجسم الأبيض. نحن هنا وصف بروتوكول خطوة بخطوة لعزل المبيضين من أواخر يرقات ذبابة الفاكهة طور مرحلي third (LL3) ، تليها تلطيخ مع الأضداد الفلورسنت. نحن نقدم بعض الحلول التقنية لمشاكل مثل تحديد المبيضين ، وتلطيخ وغسل الأنسجة التي لا تغرق ، والتأكد من أن الأجسام المضادة تخترق الأنسجة. ويمكن تطبيق هذا البروتوكول على مراحل في وقت سابق من اليرقات والخصيتين اليرقات كذلك.
البروتوكول
1. البيض
- قبل خمسة أيام من تشريح : السماح الإناث الملقحة لوضع البيض لمدة 2-4 ساعات على المواد الغذائية الطازجة تستكمل مع الخميرة. للحصول على اليرقات متزامنة ومتطورة ، فمن المهم ألا يكون المثقف مكتظة (حوالي 30 بيضة / فيال 25mm). عادة ، يتم استخدام 7-16 الإناث في قارورة ، اعتمادا على مدى نجاحها في إرساء.
2. اختيار اليرقات
- إعداد طبق زجاج 9 - جيدا تشريح مليئة المتوسطة رينغر (128mM....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هذا الفيديو يوضح عزلة والبروتوكول في الدقائق الاخيرة من تلطيخ المبيضين اليرقات طور مرحلي. لتنفيذ هذا البروتوكول بشكل روتيني وموثوق بها ، ينبغي إيلاء الانتباه إلى النقاط التالية :
- ليرقات متزامنة ومتطورا بشكل جيد ، يجب تجنب الإفراط الازدحام.
- لتجنب فقدان المبيضين وشفافة صغيرة ، للتأكد من تشريح الجسم الدهون سليمة. وهذا سوف يساعد أيضا في تحديد م.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
ويدعم الدردشة عن طريق منح ماري كوري إعادة الاندماج. وأيد هذا العمل من جانب إسرائيل لا علم منحة الصندوق. 1146-1108 ، من قبل هيلين ومارتن كيميل معهد أبحاث الخلايا الجذعية في معهد وايزمان للعلوم ، ومؤسسة Leir الخيرية.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| NaCl | JT Baker | ||
| KCl | Merck &وشركة. | ||
| CaCl22 | Sigma-Aldrich | ||
| MgCl22 | Merck &وشركاه، Inc. | ||
| السكروز | JT Baker | ||
| هيبس (Hepes) | Sigma-Aldrich | ||
| محلول ملحي منظم بالفوسفات (PBS) | Sigma-Aldrich | ||
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | ||
| ألبومين بقري، الجزء الخامس (Fraction V) | MP Biomedicals | 160069 | |
| ملاقط بيولوجيا Dumont 5 dumstar مصقولة | Fine Science Tools | 11295-10 | |
| حامل دبابيس مطلي بالنيكل | Fine Science Tools | 26018-17 | |
| دبابيس دقيقة من الفولاذ المقاوم للصدأ، بقطر 0.1 مم وطول 10 مم | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| أطباق ذات 9 عيون، 85×100 مم، القطر الخارجي 22 مم × العمق 7 مم | Corning | 7220-85 | |
| مجهر ستيريو MZ 16.5 مع قاعدة إضاءة نافذة قياسية TL ST | Leica Microsystems | ||
| أطباق ذات 6 آبار | Costar | 3516 | |
| شرائح | منزل-جلازر | 798 | |
| شرائح التغطية | Corning | 2940-223 | |
| وسائط التثبيت | Vectashield | H-1200 | |
| مصفاة خلايا | Falcon BD | FAL352350 | |
| الأجسام المضادة 1B1 | بنك الهجين للدراسات النمائية | ||
| مضاد للازدحام المروري | مختبر الدكتورة Dorothea Godt | ||
| مضاد فاسا (Anti-Vasa) | مختبر الدكتورة روت ليمان | ||
| مضاد β-جالاكتوزيداز | كابل | ||
| الأجسام المضادة الثانوية | Jackson ImmunoResearch |
المراجع
- Fuller, M. T., Spradling, A. C. Male and female Drosophila germline stem cells: two versions of immortality. Science. 316, 402-404 (2007).
- Li, L., Xie, T. Stem cell niche: structure and function. Annual review of cell and developmental biology. 21<....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
