توضح هذه المقالة اختيار تحقيقات مناسبة للأسماك وحيدة الخلية ، وتقنيات لنشر قسيم أرومي النوى ، والتهجين في الموقع وسجل إشارة ، تطبق على التشخيص الجيني قبل الزرع (PGD) في عملية إعداد سريرية.
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
قبل انغراس التشخيص الوراثي (PGD) هو البديل الذي أنشئ لتشخيص ما قبل الولادة ، وينطوي على اختيار ما قبل زرع الأجنة من الأتراب التي تم إنشاؤها بواسطة تكنولوجيا المساعدة على الإنجاب (ART). قد تكون هناك حاجة لأن هذا الاختيار أحادي الجين العائلي للمرض (التليف الكيسي على سبيل المثال) ، أو لشريك واحد يحمل كروموسوم إعادة ترتيب (على سبيل المثال إزفاء متبادلة في الاتجاهين). PGD متاحة للأزواج الذين لديهم أطفال المتأثرين السابقة ، و / أو في حالة إعادة ترتيب الكروموسومات والاجهاض المتكرر ، أو العقم. البويضات الملقحة ويستنشق التالية تحفيز المبيض من خلال الانغماس في المختبر في السائل المنوي (IVF) أو عن طريق حقن الحيوان المنوي داخل الهيولى من الفردية (ICSI). وتحتاج فحص ما قبل الزرع في مرحلة الانقسام الأجنة ، وعادة عن طريق إزالة من خلية واحدة في اليوم 3 بعد الإخصاب ، ويتم اختبار الخلايا تحتاج فحص لتحديد الوضع الجيني للجنين. مضان التهجين في الموضع (FISH) على نواة ثابتة من الخلايا تحتاج فحص مع هدف محدد تحقيقات الحمض النووي هو الأسلوب المفضل للكشف عن الخلل الصبغي المرتبطة إعادة ترتيب الكروموسومات ، واختيار الأجنة الإناث في الأسر التي لديها العاشر مرتبطة المرض الذي لا يوجد أي طفرة معينة الاختبار. كما تم FISH تستخدم لفحص الاجنة لعدم توازن الصبغيات في الكروموسوم عفوية (المعروف أيضا باسم أو PGS AS - PGD) من أجل محاولة تحسين كفاءة المساعدة على الإنجاب ، إلا أن القيمة التنبؤية لهذا الاختبار باستخدام تقنية FISH نشر وصفها هنا ومن المرجح أن تكون منخفضة بشكل غير مقبول في أيدي معظم الناس وليس من المستحسن للاستخدام السريري الروتيني. وصفنا اختيار تحقيقات مناسبة للأسماك وحيدة الخلية ، وتقنيات لنشر قسيم أرومي النوى ، والتهجين في الموقع وسجل إشارة ، تطبق على PGD في عملية إعداد سريرية.
البروتوكول
1. Lysing ونشر نواة من الخزعة قسيم أرومي
- وينبغي أن نكون مستعدين للتحلل الخلية عازلة تنتشر الخلايا (0.2 ٪ Tween20 في حمض الهيدروكلوريك 0.01 م ، ودرجة الحموضة 2.0) 24 ساعة مسبقا وحفظها عند درجة حرارة -20 درجة مئوية. تحضير 100 مل وتصفية 20 مل في وعاء معقم 30 مل الجميع باستخدام المحاقن المعقمة وتصفية 20 مل حقنة. 1 مل الاستغناء aliquots في 10-15 1.7 مل أنابيب microcentrifuge العقيمة ، وثيقة وتسمية الأنابيب قبل التجميد. فمن المستحسن أن يكون على دفعتين المختلفة الاستخدام ، دفعة جديدة والدفعة السابقة ، والتي تم اختبارها ويمكن استخدامها إذا كانت دفعة جديدة غير مرضية.
- تذويب المنطقة العازلة تحلل في درجة حرارة الغرفة 30 دقيقة قبل إجراء الخزعة. للأغراض العملية سوف تكون درجة حرارة الغرفة بين درجة الحرارة ودرجة حرارة اليد.
- درجة دائرة صغيرة (قطرها حوالي 5 ملم) على الجانب السفلي من شريحة أمين المغلفة (مثل Genetix) باستخدام قلم الماس والتسمية قبل الشريحة مع رقم القضية ، فريد رقم الشريحة والتاريخ الخزعة. استخدام شريحة منفصلة لكل قسيم أرومي بالترتيب العددي ، والتسمية مع عدد الأجنة. ينبغي أن توضع على الشرائح مع قلم رصاص الصلبة مثل 4H ، و "نشف" مع القفازات المطاطية لإزالة أي غبار الغرافيت.
- ضع كمية صغيرة من تحلل العازلة داخل الدائرة.
- نقل قسيم أرومي الخزعة في المخزن المؤقت تحلل. إذا لزم الأمر إضافة العازلة تحلل داخل الدائرة حتى يبدأ في الخلية ليز ، وينبغي الخلية ليز تماما والسيتوبلازم تفريق قبل أن يجف العازلة.
- مراقبة النواة لضمان بقائه ضمن دائرة وضاع لا ؛ إذا كانت الخلية لا يملك نواة أو قد نوى متعددة ، خزعة خلية أخرى.
- ترك الشريحة لتجف في الهواء في درجة حرارة الغرفة.
2. في الموقع التهجين من نواة واحدة قسيم أرومي
- تعد سلسلة الايثانول (70 و 90 و 100 ٪) تتكون في الماء المقطر المعقم.
- تشغيل وتعيين كتلة ساخنة (على سبيل المثال أو Hybaid Omnislide Hybrite Vysis) إلى 75 درجة مئوية.
- تحقيقات تذويب ، الدوامة ، والطرد المركزي. وينبغي أن شهدت الكواشف والتحقق من أن يكون صحيحا حتى قبل اتخاذ هذا الخليط التحقيق. أحجام ماصة على النحو المحدد من قبل الشركة المصنعة لتعويض خليط التحقيق في أنبوب 0.65 مل microcentrifuge معقمة ودوامة الطرد المركزي وقبل الاستخدام. وينبغي أن الحجم الكلي للخليط التحقيق تكون كافية للسماح لفحصها 2 ميكرولتر في نواة وتقريب تصل إلى 10 ميكرولتر أقرب للسماح بهامش أمان.
- قبل غسل الشرائح في الجرار coplin باستخدام الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) (7.0 درجة الحموضة : 0.14 م كلوريد الصوديوم ، 3 مم بوكل ، 10 ملي نا 2 هبو 4 ، 2 مم KH 2 PO 4) لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
- شطف شرائح مرتين في ماء مقطر معقم.
- يذوى الشرائح مع سلسلة الايثانول (70 ، 90 ، و 100 ٪) عن كل 2 دقيقة في درجة حرارة الغرفة والهواء الجاف. مغمورة تماما ضمان الشرائح وإذا كان أي غبار الغرافيت يطفو على السطح ، وتمتص بمنديل نظيف.
- تسجيل موقف للنواة داخل دائرة من خلال وضع تصور للمرحلة مجهر التباين.
- يذوى مع الإيثانول بنسبة 100 ٪ لمدة 2 دقيقة في درجة حرارة الغرفة والهواء الجاف.
- تطبيق 2 ميكرولتر من خليط التحقيق ، وتغطي مع 9 × 9 ملم ساترة (1 / 4 من 18 × 18 مم ساترة NO.1).
- ختم حواف ساترة مع الاسمنت والمطاط (مثل الصمغ البقرة ؛ تدقيق البقرة).
- Codenature الشرائح على كتلة الساخنة عند 75 درجة مئوية لمدة 5 دقائق ، ثم بين عشية وضحاها هجن الشرائح (16-20 ح) في غرفة ترطيب عند 37 درجة مئوية. ويمزج التحقيق التي تتكون بالكامل من تحقيقات السنترومير (أي لحالات مرتبطة بالجنس) تعطي نتيجة مرضية بعد 60 دقيقة من التهجين.
- يعد حمام مائي مع الجرار coplin كافية والحرارة إلى 71 درجة مئوية.
- إعداد 0.4x سيترات المالحة القياسية (SSC) صرامة حل غسل (7.0 درجة الحموضة عند 71 درجة مئوية ، وكلوريد الصوديوم 0.06 M 6 مم ، C 6 H 5 O 7 3 نا 0.2 H 2 O) والحرارة في حمام مائي.
- الاستغناء عن 50 مل من غسل صرامة في جرة coplin المطلوبة ، وتأكد من أن درجة الحرارة 71 درجة مئوية قبل استخدامها على الفور باستخدام ميزان حرارة نظيف.
- إزالة بعناية الاسمنت والمطاط من كل الشرائح وشطف قبالة باستخدام ساترة 4X SSC/0.05 Tween20 ٪ (الرقم الهيدروجيني 7.0) في درجة حرارة الغرفة.
- تغسل الشرائح في غسل SSC 0.4x صرامة في 71 دقيقة لمدة 5 درجة مئوية. غسل ما لا يزيد عن 6 شرائح في جرة coplin.
- تغسل الشرائح في 4X Tween20 SSC/0.05 ٪ في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 دقيقة.
- إذا كان يحتوي على مزيج المسبار المسبار المسمى بشكل غير مباشر (ق) ، واستنزاف الشرائح من السوائل الزائدة وتطبيق 20 ميكرولتر من الأجسام المضادة مترافق fluorescently تحت مربع 20 x 20 مم من Parafilm.
- احتضان مرطب في غرفة في 37 دقيقة لمدة 15 درجة مئوية.
- إزالة Parafilm ويغسل مرة واحدة في 4X Tween20 SSC/0.05 ٪ في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 دقيقة.
- تغسل مرتين لمدة 2 دقيقة في برنامج تلفزيونير درجة حرارة الغرفة واستنزاف الشرائح.
- 6 تطبيق ميكرولتر من دابي / Vectashield (160 نانوغرام من 4 '،6 - diamidino - 2 - phenylindole هيدروكلوريد في 1 مل من المتوسط Vectashield المتصاعدة ، المتجهات مختبرات) إلى 22 مم 22 × لا. 0 ساترة وعكس الشريحة على ساترة.
- وختم وصمة عار على حواف ساترة مع طلاء الأظافر واضحة.
3. التحليل باستخدام مجهر الإسفار مجهزة بالمعدات المناسبة مع الفلاتر المناسبة لمجسات مستعملة.
- إشارات النتيجة المباشرة التي تصور باستخدام مجهر مضان واحد الفرقة تمرير مرشحات لكل ملون تألقي في مقايسة. وينبغي أن سجل كل نواة من قبل اثنين من المحللين. وينبغي أن يكون المبدأ التوجيهي العام يؤدي الى التهديف من إشارة واحدة حيث إشارتين المتقاربة أقل من مجال واحد (إشارة العرض) وبصرف النظر ، ولكن الحكم على أساس الخبرة يحتاج إلى أن يمارس لتفسير إشارات متفاوتة الحجم والكثافة ، والانفصال.
- استخدام برامج التصوير (مثل إيزيس ، MetaSystems ، Altlussheim ، ألمانيا ؛ CytoVision ، Genetix) لالتقاط صورة من نواة لتأكيد التشخيص البصري ، وأرشفة الصور كجزء من خطة لضمان جودة المختبرات.
4. ممثل النتائج :
ينبغي النظر الطورية والطور البيني من نوى الخلايا الليمفاوية مثقف الدم المحيطي للتأكد من أن تحقيقات المختارة هي محددة للصبغيات إزفاء ، بالمعلومات عن نقاط (التحقيقات subtelomere ينبغي هجن فقط على قطاعات وtranslocated التحقيق السنترومير (ق) إلى تتمحور وينبغي أن الجزء (ق)) واشارات في نواة الطور البيني يكون مشرقا ومنفصلة. سجل عدد من الإشارات لكل التحقيق في نواة الطور البيني 100 من كل شريك من المستحسن لتقييم كفاءة الفحص. في هذه الحالة وسجل 2 إشارات في 95 ٪ -99 ٪ من النوى لكل التحقيق. الشكل 1 يبين الطورية ونواة الطور البيني من التحضير لإزفاء متبادلة بين الأسلحة قصيرة من الكروموزومات 5 و 9.
وينبغي أن الإشارات في نواة الطور البيني من blastomeres الجنين يكون مشرقا ومنفصلة ومستقلة وسجل باستخدام مرشحات تمرير الفرقة عن الألوان المستخدمة. ويبين الشكل 2 نواة قسيم أرومي مع نمط إشارة طبيعية (2 نسخ عن جميع مواضع اختبار) بما يتفق مع الكروموسومات العادي أو متوازنة للكروموسوم 5 و 9 ، ونواة مع إشارة نمط غير طبيعي يتفق مع منتج غير المتوازن للإزفاء الذي أحاد الصبغي (نسخة واحدة) للجزء translocated من كروموسوم 5 و تثلث الصبغي (3 نسخ) للجزء من كروموسوم translocated 9.
الشكل 1 وانتشار الطورية ونواة الطور البيني المحضرة من مثقف اللمفاويات في الدم المحيطي من حاملة لإزفاء متبادلة بين الأسلحة قصيرة من الكروموزومات 5 و 9 نقاط في 5p14.3 مع و9p24.1 : 46 ، س ص ، ر (5 ؛ 9) (p14.3 ؛ p24.1) العش ر (5 ؛ 9ptel30 ، 5ptel48 + ، + 9cen) ؛ 9) 5ptel48 ، 9ptel30 + ( وقد تم اختيار كل من الأسماك للتحقيقات شرائح translocated (5p14.3 → 5pter ، أحمر Cytocell subtelomere5ptel48 TexasRed ؛ 9p24.1 → 9pter ، الأخضر Cytocell subtelomere 9ptel30 FITC) وتتمحور حول الجزء من الصبغي 9 (9p24.1 → 9qter ، الأزرق ابوت CEP 9 القمر الصناعي SpectrumAqua ألفا).
القبض على الرقم 2. إشارات في نواة الطور البيني قسيم أرومي من يوم 3 أجنة باستخدام فلتر مختلفة لكل ملون تألقي ودمجها لتكوين صورة مركبة. (أ) اثنان عن كل الإشارات تشير إلى التحقيق نسختين من كل مكان ، وهو ما يتسق مع تكملة طبيعية أو متوازنة لإزفاء الكروموسومات. (ب) والاشارة الحمراء ، وثلاث إشارات خضراء وزرقاء تشير إلى إشارتين نسخة واحدة من الجزء translocated من كروموسوم 5 ، وثلاث نسخ من الجزء translocated من كروموسوم (9) ونسختين من الجزء مركزية من الكروموسوم 9 ، وهو ما يتسق مع المجاورة -1 الفصل بين إزفاء مما أسفر عن المنتجات غير متوازن مع أحاد الصبغي ل5pter → 5p14.3 وتثلث الصبغي ل9pter → 9p24.1.
المناقشة
تطبيق مضان التهجين في الموضع (FISH) لخلية جنين واحد (قسيم أرومي) تحديات خاصة على حد سواء في الجوانب العملية وتفسير نمط الإشارة. الخلية الخزعة تحتاج إلى أن تنتشر داخل منطقة محددة مسبقا على الشريحة من أجل تسهيل السمكية في توطين التالية ؛ العناية القصوى يجب أن يؤخذ في ضمان lysed الخلية ، التي تم تفريق السيتوبلازم والنواة التي مرئيا وسليمة ، ولأن التشخيص يعتمد على النتائج من هذه الخلية واحدة ، وسجل الصارمة وتفسيرها وينبغي تطبيق المبادئ التوجيهية. ومع ذلك ، في أيدي ذوي الخبرة ، والسمك هي تقنية قوية لمرحلة ما قبل انغراس التشخيص الوراثي (PGD) في الممارسة السريرية. مبدأ PGD بواسطة FISH هي التي يمكن استخدامها تحقيقات هدف محدد الحمض النووي المسمى مع fluorochromes haptens مختلفة أو للكشف عن عدد النسخ من مواضع محددة ، وبالتالي للكشف عن الخلل الصبغي المرتبطة العزل الانتصافي لإعادة ترتيب الكروموسومات (1) ، بما في ذلك روبرتسوني translocations ، translocations المتبادل ، ظاهرة الانقلاب ، وإعادة ترتيب معقدة (2). ويمكن أيضا أن تستخدم السمكية لتحديد الأجنة الإناث في الأسر التي لديها العاشر مرتبطة المرض ، والتي لا يوجد اختبار طفرة معينة (3 ، 4). الأكثر إثارة للجدل ، كما تم السمكية المستخدمة للكشف عن عدم توازن الصبغيات في الكروموسوم متفرقة من أجل محاولة تحسين كفاءة المساعدة على الإنجاب (5 ، 6) ، إلا أن القيمة التنبؤية لهذا الاختبار باستخدام FSIH ومن المرجح أن تكون منخفضة بشكل غير مقبول في معظم الناس لا ينصح اليدين وذلك للاستعمال السريري الروتيني (7). هذا المقال يركز على الجوانب التقنية والقيود المطبقة على الأسماك وحيدة الخلية التشخيص السريري.
طرق انتشاره وتحديد blastomeres واحدة تشمل الميثانول / حامض الخليك (5 ، 8) ، توين / حمض الهيدروكلوريك (9) ، ومزيج من توين / حمض الهيدروكلوريك والميثانول / حامض الخليك (10). تشمل معالجة الاختلافات ناقص التوتر من الخلايا قبل نشر و / أو البيبسين والعلاج بارافورمالدهيد بعد التثبيت. وينبغي التحقق من صحة الأسلوب المناسب للمختبر (14). يوصف أسلوب توين / حمض الهيدروكلوريك بالتفصيل في هذه المقالة. أسلوب توين / حمض الهيدروكلوريك هو بسيط للغاية من الناحية الفنية واستنساخه في المختبرات المختلفة. ويمكن استخدام هذا الأسلوب لإعداد نواة واحدة لتشخيص السمكية من تحديد الجنس وإعادة ترتيب الكروموسومات مع دقة التشخيص مقبول (7).
يمكن أن يمزج الجمع بين التحقيق مباشرة والمسمى المسمى غير مباشرة التحقيقات ، والتحقيقات من مختلف الصانعين. وينبغي تجنب تحقيقات للتعرف مناطق متعددة الأشكال الصبغي (11 ، 12) ، أو تلك المعروفة العابرة للهجن بشكل كبير مع غيرها من الصبغيات (13) ، رغم أنه يمكن استخدامها إذا ثبت أن تكون محددة ومناسبة لPGD عن طريق اختبار قبل الشركاء على حد سواء الإنجابية . fluorochromes متاح / haptens واستراتيجيات تميز تحقيقات تشمل ما يلي : تكساس الأحمر (TR) ، فلوريسئين ثيوسيانات (FITC) ، SpectrumGreen (Vysis) ، SpectrumOrange (Vysis) ، SpectrumAqua ، مع الكشف عن التحقيقات biotinylated TR - أفيدين ، FITC أفيدين ، أو CY - 5 streptavidin (تصور استخدام عامل تصفية FarRed) ، وهو مزيج من مجسات أحمر وأخضر لإنتاج إشارة الصفراء ، وهي الجولة الثانية من التهجين وخلق لون ثالث من خلال التقاط متتابع للSpectrumOrange باستخدام TexasRed وتصفية SpectrumGold).
وأوصت مجموعة المسبار يحتوي على ثلاثة تحقيقات ومحددة للمناطق السنترومير من كروموزومات X و Y واحد صبغي جسدي ، لتحديد نوع الجنس (14) ، ويستخدم المجس راثي لوضع الصيغة الصبغية وبالتالي التفريق بين تثلث الصبغي X (2N ، 47 ، XXX) ، وتثلث الصيغة الصبغية (3N ، 69 ، XXX) ، وبين رباع الصبغي X (48 ، XXXX) ورباع الصيغة الصبغية (4N ، 92 ، XXXX). تشكيل لتحقيق النموذجية المطبقة في هذا الإعداد هو مزيج يحتوي على AneuVysion ابوت ألفا الساتلية X ، Y ، و 18 ، وقد تم التحقيق أثبتت هذه المجموعة لديها نسبة التعدد قليلة جدا ، وبالتالي ما قبل المعالجة متابعة العمل من الشركاء الإنجابية ليس مطلوبا (14).
وينبغي تحقيق هذا المزيج عن أي إعادة ترتيب معين : تحتوي على الأقل من الناحية المثالية تحقيقات كافية لكشف كل المنتجات المتوقعة لإعادة ترتيب مع الخلل الصبغي. إذا لم يكن هذا ممكنا ، يمزج التحقيق حيث تم تقييم المنتجات التي لم يتم كشفها غير متوازن لتكون غير قابلة للاستمرار في حمل معترف بها ويحتمل أن يكون الانتشار المنخفض جدا قد يكون مقبولا (14). يمكن اختباره على metaphases اللمفاويات مثقف من كل من الشركاء الإنجابية. ينبغي النظر لا يقل عن عشرة ينتشر الطورية لخصوصية التحقيق ، وعبر أشكال متعددة من التهجين ، وحاملة لكروموسوم إعادة ترتيب ، لضمان أن التحقيقات هجن كما هو متوقع لقطاعات مختلفة من إعادة ترتيب. بالإضافة ، يجب أن لا يقل عن 100 سجل نواة الطور البيني من هذه الاستعدادات لتقييم نوعية الإشارة ، والسطوع ، والتحوط (14).
Commeو rcial مجموعات التحقيق PGS المتاحة (مثل ابوت MultiVysion PB أو PGT) ، التي تستهدف في معظم الأحيان الكروموسومات جدت لتكون في المنتجات مختل الصيغة الصبغية من الحمل ، وتضم التحقيق كروموسوم واحد لكل المستهدفة. عادة ما قد يكون نواة التهجين الثاني مع تحقيقات إضافية للصبغيات توفير مقايسة للصبغيات 13 ، 15 ، 16 ، 18 ، 21 ، 22 ، وXY (14). القيمة التنبؤية لهذا الاختبار باستخدام تقنية FISH نشر وصفها هنا من المحتمل أن تكون منخفضة بشكل غير مقبول في أيدي معظم الناس وليس من المستحسن للاستخدام السريري الروتيني (7 ، 15).
تقنيات مثل التهجين الجينومي المقارن (CGH) المطبقة على الخلايا وحيدة قادرة على اختبار لنسخة من كل عدد الكروموسومات (ويلتون وآخرون 2001) ، واستخدام أشكال متعددة من تركيبة واحدة (SNP) صفائف والتحليل الكمي (ويلز وآخرون . 2008) أو "karyomapping" التنميط الجيني (Handyside وآخرون 2009) واعدة تقنيات بديلة للكشف عن عدم توازن الصبغيات في الكروموسوم. ومع ذلك ، فإن قرار الحد من اختلال التوازن والدقة لشريحة لا تزال غير مؤكدة ، ومن المحتمل أن الأسماك سيستمر هذا الأسلوب المفضل لإعادة ترتيب الكروموسومات التي تنطوي على قطاعات صغيرة.
الإفصاحات
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| حمض الهيدروكلوريك، 2.5 لتر | VWR international | 101254H | |
| كلوريد الصوديوم، 5 كجم | VWR international | 443827W | |
| كلوريد البوتاسيوم، ٢٥٠ جم | VWR international | 26764.232 | |
| أورثوفوسفات ثنائي الصوديوم الهيدروجينية اللامائية، 500 جرام | VWR international | 102494C | |
| فوسفات البوتاسيوم ثنائي الهيدروجين، 500 جرام | VWR international | 10203 4ب | |
| حبيبات هيدروكسيد الصوديوم، 500 جم | VWR international | 28245.265 | |
| Tween20، 500 مل | VWR international | 663684B | |
| إيثانول، 2.5 لتر | VWR international | 8.18760.2500 | الرسوم مدفوعة |
| سترات ثلاثي الصوديوم، 5 كجم | VWR international | 27833.363 | |
| صمغ البقر، 250 مل | شركة Cow Proofings المحدودة | لم يعد متاحاً | لا تزال المخزونات القديمة متوفرة في محلات بيع الأدوات الفنية |
| DAPI/Antifade ES، 0.125μجم/مل، 500 ميكرولتر | Cytocell Ltd. | DES500L | 150μقنينة تجميع العينات’الموردة مع كل مسبار Cytocell TEL |
| طلاء أظافر، 12 مل | أحذية واقية | 10088316001 | |
| شرائح مغلفة بالأمين، 25 | جينيتيكس | K2615 | |
| DAPI، 0.1 مل | Sigma-Aldrich | D-9542 | |
| Vectashield، ١٠ مللتر | Vector Laboratories | H1000 | |
| تكساس-ريد-أفيدين، 0.001 مل | Vector Laboratories | A-2016 | |
| أفيدين مُترافق بـ FITC، 0.001 مل | Vector Laboratories | A-2011 | |
| ستربتافيدين Cy-5، 0.001 مل | GE Healthcare | PA45001 | |
| أنابيب طرد مركزي دقيقة، 1.75 مل، علبة تحتوي على 500 أنبوب | ثيسل ساينتيفيك (Thistle Scientific) | AX-MCT-175-C | |
| أنابيب طرد مركزي دقيقة، 0.6 مل، علبة من 1000 أنبوب | ثيسل ساينتيفيك (Thistle Scientific) | AX-MCT-060-C-CS | |
| حاويات عامة سعة 30 مل، عبوة من 400 قطعة | ستيريلين (Sterilin) | 128B | متوفر من NHS Supply Chain، رقم الكتالوج KCP053 |
| كتلة تسخين | |||
| موقد كحولي، مقبس موقد كحولي، فتيل موقد كحولي | VWR international | 451-0107 451-3112 451-3111 | |
| المصّاصات الزجاجية المسدودة | Fisher Scientific | PMK-300-052R | |
| مجهر التشريح | Wild Heerbrugg | ||
| مناديل ورقية، ١٠٠ علبة | سلسلة توريد هيئة الخدمات الصحية الوطنية (NHS) | MJT058 | |
| صواني الاستنبات المعدنية | |||
| صوانٍ بلاستيكية من الميلامين | VWR international | 682-009 | |
| فرن | |||
| فوهة الماصة الفموية | شركة المستلزمات المختبرية العلمية المحدودة | HAE3700 | |
| الأنابيب | |||
| مرشح حقنة، 0.2μحجم المسام م، بقطر 25 مم | Fisher Scientific | FDM-340-010U | |
| قلم الماس | VWR international | 818-0021 | |
| وحدة تسخين الشرائح (Hot Block) | Thermo Fisher Scientific, Inc. | HBOSBB | |
| غرفة التهجين | |||
| لفافة نسيجية | سلسلة توريد هيئة الخدمات الصحية الوطنية (NHS) | MJT004 | |
| وعاء شيفيرديكر (Schieferdecker Jar) | VWR international | 631-9313 | |
| وعاء كوبلن | VWR international | 631-9331 | |
| ملقط دقيق | VWR international | 232-2123 | |
| ملقط غير مدبب | VWR international | 232-2113 | |
| كأس زجاجي سعة 1000 مللتر | VWR international | 213-1642 | |
| مجهر تباين الأطوار | أجهزة Nikon | E200 | |
| بطاقات لطخة خالية من الألياف، علبة تحتوي على 100 بطاقة | Fisher Scientific | SDE1 | |
| شرائح مجهرية ذات طرف متجمد أزرق، علبة تحتوي على 100 شريحة | شركة التوريدات المختبرية العلمية المحدودة | MIC3022 | |
| أغطية شرائح، 18×18 مم، رقم 1، علبة تحتوي على 200 قطعة | شركة التوريدات المختبرية العلمية المحدودة | MIC3110 | |
| أغطية شرائح، 22×22 مم، رقم 0، علبة تحتوي على 200 قطعة | شركة المستلزمات المختبرية العلمية المحدودة | MIC3104 | |
| غطاءات شرائح، 22×50 مم، رقم 0، علبة تحتوي على 100 قطعة | شركة المستلزمات المختبرية العلمية المحدودة | MIC3206 | |
| محقنة سعة 1 مل، علبة تحتوي على 100 قطعة | سلسلة توريد هيئة الخدمات الصحية الوطنية (NHS Supply Chain) | FWC045 | |
| رأس ماصة سعة 1 مل، 10 رفوف تحتوي كل منها على 1000 رأس | ثيستل ساينتيفيك (Thistle Scientific) | AX-T-1000-C-L-R | |
| حضّانة | خلايا بطانة الأوعية الدموية المبطنة للرئة (LEEC) | ||
| حمام مائي | معدات المنحة | W22 | |
| ميزان حرارة كحولي | تتوفر مصادر متنوعة | ||
| مقياس الرقم الهيدروجيني (pH Meter) | Jenway | 3305 | |
| قطب قياس الأس الهيدروجيني (pH) | VWR international | 662-1759 | قابس BNC مناسب لمقياس pH من نوع Jenway 3305 |
| مقلب حراري | بيبي | HC502 | |
| ماصات باستور سعة 1 مل، علبة تحتوي على 500 قطعة | شركة التجهيزات المختبرية العلمية المحدودة | PIP4202 | |
| بارافيلم، 50 مم × 75 م | VWR international | 291-1214 |
المراجع
- Scriven, P. N., Handyside, A. H., Ogilvie, C. M. Chromosome translocations: segregation modes and strategies for preimplantation genetic diagnosis. Prenat. Diagn. 18, 1437-1449 (1998).
- Harper, J. C. Preimplantation genetic diagnosis for chromosome rearrangements. Preimplantation Genetic Diagnosis. , 2nd Ed, Cambridge University Press. 194-201 (2009).
- Harper, J. C., Coonen, E., Ramaekers, F. C. S., Delhanty, J. D. A., Handyside, A. H., Winston, R. M. L., Hopman, A. H. N. Identification of the sex of human preimplantation embryos in two hours using an improved spreading method and fluorescent in situ hybridisation using directly labelled probes. Hum. Reprod. 9, 721-724 (1994).
- Harper, J. C. Preimplantation genetic diagnosis for sex-linked diseases and sex-selection for non-medical reasons. Preimplantation Genetic Diagnosis. , 2nd Ed, Cambridge University Press. 230-235 (2009).
- Munné, S., Lee, A., Rosenwaks, Z., Grifo, J., Cohen, J. Diagnosis of major chromosome aneuploidies in human preimplantation embryos. Hum. Reprod. 8, 2185-2192 (1993).
- Harper, J. C. Preimplantation genetic diagnosis for infertility (preimplantation genetic screening). Preimplantation Genetic Diagnosis. , 2nd Ed, Cambridge University Press. 203-229 (2009).
- Scriven, P. N., Bossuyt, P. M. Diagnostic accuracy: theoretical models for preimplantation genetic testing of a single nucleus using the fluorescence in situ hybridization technique. Hum Reprod. Cytogenetics. 5, 394-400 (2010).
- Coonen, E., Dumoulin, J. C., Ramaekers, F. C., Hopman, A. H. Optimal preparation of preimplantation embryo interphase nuclei for analysis by fluorescence in-situ hybridization. Hum. Reprod. 9, 533-537 (1994).
- Dozortsev, D. I., McGinnis, K. T. An improved fixation technique for fluorescence in situ hybridization for preimplantation genetic diagnosis. Fertil. Steril. 76, 186-188 (2001).
- Hsu, L. Y., Benn, P. A., Tannenbaum, H. L., Perlis, T., Carlson, A. D. Chromosomal polymorphisms of 1, 9, 16, and Y in 4 major ethnic groups: a large prenatal study. Am. J. Med. Genet. 26, 95-101 (1987).
- Shim, S. H., Pan, A., Huang, X. L., Tonk, V. S., Varma, S. K., Milunsky, J. M., Wyandt, H. E. FISH variants with D15Z1. J. Assoc. Genet. Technol. 29, 146-151 (2003).
- Knight, S. J., Flint, J. Perfect endings: a review of subtelomeric probes and their use in clinical diagnosis. J. Med. Genet. 37, 401-409 (2000).
- Thornhill, A. R., de Die-Smulders, C. E., Geraedts, J. P., Harper, J. C., Harton, G. L., Lavery, S. A., Moutou, C., Robinson, M. D., Schmutzler, A. G., Scriven, P. N., Sermon, K. D., Wilton, L. ESHRE PGD Consortium (PGS) ESHRE PGD Consortium 'Best practice guidelines for clinical preimplantation genetic diagnosis (PGD) and preimplantation genetic screening (PGS)'. Hum. Reprod. 20, 35-48 (2005).
- Munné, S., Wells, D., Cohen, J. Technology requirements for preimplantation genetic diagnosis to improve assisted reproduction outcomes. Fertil. Steril. 94, 408-430 (2010).
- Wilton, L., Williamson, R., McBain, J., Edgar, D., Voullaire, L. Birth of a healthy infant after preimplantation confirmation of euploidy by comparative genomic hybridization. N. Engl. J. Med. 345, 1537-1541 (2001).
- Wells, D., Alfarawati, S., Fragouli, E. Use of comprehensive chromosomal screening for embryo assessment: microarrays and CGH. Mol. Hum. Reprod. 14, 703-710 (2008).
- Handyside, A. H., Harton, G. L., Mariani, B., Thornhill, A. R., Affara, N., Shaw, M. A., Griffin, D. K. Karyomapping, a universal method for genome wide analysis of genetic disease based on mapping crossovers between parental haplotypes. J. Med. Genet. 47, 651-658 (2010).
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
