مقالة منهجية

الاستقطاب إزفاء من البروتينات في نيون القيطم الأدمة في الاستجابة لاشارة Wnt

DOI:

10.3791/2700

⸱

مايو 26, 2011

 , 
1Department of Developmental and Regenerative Biology, Mount Sinai School of Medicine

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أصبح القيطم الجنينية الأديم الظاهر نموذجا جذابا للدراسات القطبية الخلية. وصفت والفحص ، التي يتم فيها توزيع التحت خلوية المقررة من البروتينات الفلورية في خلايا الأديم الظاهر. وسوف يساعد هذا البروتوكول تعالج المسائل المتعلقة بمكافحة المكاني للإشارات.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

قطبية الخلية هي الخاصية الأساسية للخلايا حقيقية النواة التي يتم تنظيمها بشكل حيوي على حد سواء بفعل عوامل ذاتية وخارجي أثناء التطور الجنيني 1 و 2. واحد من مسارات إشارات تشارك في هذا النظام هو الطريق Wnt ، والذي يستخدم عدة مرات خلال مرحلة التطور الجنيني والحرجة لأمراض الإنسان 3 ، 4 ، 5. المكونات الجزيئية متعددة من هذا الممر تنظيم coordinately يشير بطريقة مكانيا المقيدة ، ولكن لا يفهم الآليات الكامنة بشكل كامل. القيطم طلائي الخلايا الجنينية هو نظام ممتاز لدراسة توطين التحت خلوية من مختلف البروتينات الإشارة. يتم التعبير عن البروتينات الفلورية الانصهار في الأجنة القيطم microinjection بواسطة الحمض النووي الريبي ، مستعدون explants الأدمة ويتم تقييم الترجمة البروتين epifluorescence. في هذا البروتوكول التجريبي نحن تصف كيفية الترجمة من Diversin التحت خلوية ، وهو بروتين حشوية التي تورطت في الإشارات وتحديد الخلية القطبية 6 ، 7 هو تصور في خلايا الأدمة القيطم لدراسة Wnt نقل الإشارة 8. Coexpression ليجند Wnt أو مستقبلات Frizzled يغير توزيع Diversin تنصهر مع بروتين فلوري الأحمر ، RFP ، والمجندين لغشاء الخلية بطريقة الاستقطاب 8 و 9. ينبغي لهذا البروتوكول فيفو السابقين تكون إضافة مفيدة للدراسات في المختبر من خلايا الثدييات مثقف ، والتي تتحكم المكاني للإشارة يختلف من الأنسجة سليمة وأكثر صعوبة في تحليلها.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. الإخصاب في المختبر من البيض القيطم

  1. الحصول على البيض من الضفادع الإناث التي حقنت مع موجهة الغدد التناسلية المشيمية البشرية (400 وحدة / الضفدع) 12 ساعة قبل التجربة.
  2. البيض في المكان على كمية صغيرة (0.5-1 مل) من 1 × مارك محلول رينغر تعديل (MMR) 10 إلى البيض وتخصيبها في المختبر منهم بقطعة صغيرة من الخصية تشريح. بعد 2-3 دقيقة ، إضافة 0.1 X MMR لتغطية كامل سطح البيض. في 20 دقيقة ، يتم إزالة البيض هلام معطف بواسطة السيستين 3 ٪ -- HCL (معدلة لدرجة الحموضة (8....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لقد استخدمنا بروتوكول أعلاه لتميز الترجمة في Diversin التحت خلوية. explants في القطب الحيواني ، تم الكشف عن Diversin - RFP بجوار النواة وcolocalized تويولين مع الجميع ، علامة centrosomal ، cryosections في (الشكل 1). حالما يتم التعرف على توطين التحت خلوية من البروتين ، يمكن إنشاء بنيات الحذف لإنشاء المجالات التي البروتين ضرورية وكافية لتوطين التحت خلوية. باستخدام هذا النهج ، فقد تم تعيين مجالات الترجمة من centrosomal Diversin إلى وسط وفي المجالات كربوكسي محطة من البروتين ، وكلاهما .......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويرعى الأبحاث في المختبر من قبل المركز الإنترنت سوكول الوطنية للصحة.

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gurdon, J. B. Embryonic induction --- molecular aspects. Development. 99, 285-306 (1987).
  2. Principles of Developmental Genetics. Moody, S. A. , Academic Press. (2007).
  3. Clevers, H. Wnt/beta-....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

RNA

مقالات ذات صلة