تم وصف طريقة لقياس علامات الحيوية في الأطفال حديثي الولادة نقص الأكسجين ، نقص التروية. هذا النهج يستخدم ارتفاع ضغط اللوني السائل (HPLC) واللوني للغاز طيف الكتلة (GC / MS).
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
البيوكيميائية قياس حديثي الولادة نقص الأكسجة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
وتتميز الوليدية الإسكيمية نقص الأكسجين التي نضح الدم غير كافية من الأنسجة أو عدم نظامية من الأوكسجين. ويعتقد أن هذا الشرط لسبب / تفاقم الاضطرابات الولدان موثقة جيدا بما في ذلك إعاقة للجهاز العصبي 1-3. انخفض انتاج الأدينوساين ثلاثي يحدث نتيجة لنقص في الفسفرة المؤكسدة. للتعويض عن هذه الجزيئات التي تحتوي على طاقة عالية حرمان الدولة سندات الفوسفات الطاقة هي 2 المتدهورة. هذا يؤدي إلى زيادة مستويات الأدينوساين الذي تدهورت لاحقا إينوزين ، هيبوزانتين ، الزانثين ، وأخيرا إلى حمض اليوريك. يتم تنفيذ المرحلتين الأخيرتين في هذه العملية من قبل تدهور oxidoreductase الزانثين. هذا الانزيم موجود في شكل هيدروجين الزانثين في ظل ظروف normoxic ولكن يتم تحويلها إلى أوكسيديز الزانثين (XO) تحت ظروف نقص الأكسجين ضخه - 4 ، 5. خلافا نازعة الزانثين ، XO يولد بيروكسيد الهيدروجين كمنتج ثانوي للتدهور البيورين 4 ، 6. هذا بيروكسيد الهيدروجين في الجمع مع غيرها من أنواع الاكسجين التفاعلية (ريوس) التي تنتج أثناء نقص الأكسجين ، يتأكسد حمض اليوريك لتشكيل آلانتوين ويتفاعل مع الأغشية الدهنية لتوليد malondialdehyde (MDA) 7-9 ، ومعظم الثدييات ، البشر المعفاة ، تمتلك يوريكاز الانزيم الذي يحول إلى حمض اليوريك آلانتوين. في البشر ، ومع ذلك ، لا يمكن إلا أن يكون شكلتها آلانتوين ريوس بوساطة أكسدة حمض اليوريك. وبسبب هذا ، يعتبر آلانتوين أن يكون علامة من الاكسدة في البشر ، ولكن ليس في الثدييات التي لديها يوريكاز.
نحن تصف أساليب توظيف ارتفاع ضغط اللوني السائل (HPLC) والغاز اللوني الطيف الكتلي (نماذج الدوران) لقياس العلامات الحيوية من نقص التروية نقص الأكسجين الوليدي ، ويستخدم الدم البشرية لمعظم الاختبارات. ويمكن أيضا أن تستخدم دم الحيوان مع الاعتراف احتمال يوريكاز المولدة آلانتوين. وترتبط الأيضات البيورين إلى نقص الأكسجين في وقت مبكر عام 1963 وموثوقية هيبوزانتين ، الزانثين ، وجرى التحقق من حمض اليوريك كمؤشرات البيوكيميائية حديثي الولادة من نقص الأكسجة المحققون عدة 10-13. طريقة HPLC المستخدمة في القياس الكمي للمركبات البيورين سريعة وموثوق بها ، وقابلة للتكرار. تم تعديل طريقة GC / MS المستخدمة في القياس الكمي للآلانتوين ، علامة جديدة نسبيا من الاكسدة ، وآخرون من غروبر 7. هذا الأسلوب يتجنب بعض التحف ويتطلب كميات منخفضة من العينة. ووصف الأساليب المستخدمة لتوليف MMDA في أماكن أخرى 14 و 15. تم تكييفها GC / MS الكمي القائم على نجمة داود الحمراء من Paroni وآخرون. وCighetti آخرون 16 و 17. تم قياس النشاط أوكسيديز الزانثين بواسطة HPLC عن طريق قياس تحويل تيرين isoxanthopterin إلى 18. أثبت هذا النهج لتكون حساسة بما فيه الكفاية وقابلة للتكرار.
البروتوكول
1. جمع العينات ومعالجتها
- جمع عينات من الدم في أنبوب K3E 6ml K3 EDTA وهو يحرص على الجليد.
- في غضون 2 دقيقة من جمع وأجهزة الطرد المركزي العينة بنسبة 4 في 1500 ز لمدة 10 دقيقة درجة مئوية.
- نقل طاف (البلازما) إلى أنبوب microcentrifuge 1.5ml.
- الطرد المركزي عند درجة 4 في 18000 ز لمدة 30 دقيقة.
- إزالة aliquots طاف ونقلها إلى أنابيب microcentrifuge منفص....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وصفت وسائل تسمح هنا تقييم نقص التروية نقص الأكسجة الولدان. هذا البروتوكول يجمع بين قياسات علامات الحرمان (ATP) والطاقة ، والاكسدة ، والضرر التأكسدي ، ونشاط انزيم للحصول على صورة شاملة للوجود البيوكيميائية أو حتى درجة من نقص تروية ميتة. على الرغم من جدوى هذا الأسلوب ، وهناك أوجه القصور المحتملة. أولا ، فإنه يأخذ ما يقرب من 1-2 مليلتر من الدم البلازما لجمع ما يكفي لتشغيل جميع المقايسات. وهذا لن يكون هناك مشكلة لدى البالغين أو الأطفال ، ولكنه لا يصبح مصدر قلق عند العمل مع حديثي الولا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
ويتم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة NR011209 R01 - 03
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| اسم كاشف | شركة | فهرس العدد | تعليقات (اختياري) |
| 6ml K3E أنبوب EDTA K3 | فيشر العلمية | 2204061 | |
| 5702R الطرد المركزي | فيشر العلمية | 05413319 | مع 13 و محول 16MM |
| 1.5ml microcentrifuge أنبوب | الولايات المتحدة الأمريكية والعلم | 1615-5599 | |
| 2 - Aminopurine | سيغما الدريخ | A3509 | |
| فاريان كاري معمل 100 | Agilant تكنولوجيز | 0010071500 | |
| موهوب SpeedVac | الحرارية العلمية | SC210A - 115 | |
| جهاز الطرد المركزي فلتر ميكرون | فيشر العلمية | UFC501596 | |
| Supelcosil LC - 18 - S العمود | سيغما الدريخ | 58931 | |
| Supelcosil LC - 18 - S Supelguard وحامل خرطوشة | سيغما الدريخ | 59629 | |
| HPLC | مياه | ||
| هذه النماذج فيال | فيشر العلمية | 03376607 | |
| DL - آلانتوين C - 5 -13 (1) ؛ -15 N | CDN نظائر | M - 2307 | # الكثير L340P9 |
| MTBSTFA | الحرارية العلمية | 48920 | |
| بيريدين | سيغما الدريخ | 270970 | |
| 5973E GC / MSD | اجيلنت تكنولوجيز | G7021A | جزء # ل5975E GC / MS |
| 3 Ethoxymethacrolein | سيغما الدريخ | 232548 | |
| هيدروكسيد الصوديوم | سيغما الدريخ | S5881 | |
| ثنائي كلورو ميثان | سيغما الدريخ | 270997 | |
| البنزين | سيغما الدريخ | 401765 | |
| Diisopropyl الأثير | سيغما الدريخ | 38270 | |
| BHT | سيغما الدريخ | B1378 | |
| الإيثانول | سيغما الدريخ | 459844 | |
| الفينيل هيدرازين | سيغما الدريخ | P26252 |
المراجع
- Harkness, R. A., Whitelaw, A. G., Simmonds, R. J. Intrapartum hypoxia: the association between neurological assessment of damage and abnormal excretion of ATP metabolites. J Clin Pathol. 35, 999-1007 (1982).
- Shalak, L., Perlman, J. M.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
استكشف المزيد من المقالات
