$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. إعداد الوحدات التجسيمية للجراحة
- قم بتشغيل جميع آلات التخدير وموازين Vernier الرقمية والحقن الرقمي.
ملاحظه: يجب تنظيف جميع الأدوات الجراحية وتعقيمها بشكل كاف قبل الجراحة.
- استخدم آلات التخدير مع ملحق غرفة الحث في خزانة السلامة البيولوجية (الشكل 1 أ).
- تأكد من توصيل جميع الأنابيب من آلات التخدير بالإطارات التجسيمية (الشكل 1 ب ، الإدخال 1C) والمشابك الموجودة على الأنابيب مفتوحة لجميع الوحدات المستخدمة. أغلق أي مشابك على الأنابيب التي تذهب إلى الإطارات التجسيمية التي لن تستخدم في الجراحة.
- اضبط آلات التخدير على معدل تدفق مخروط الأنف الموصى به من الشركة المصنعة بناء على وزن الماوس (على سبيل المثال ، 25 جم من وزن: معدل تدفق مخروط الأنف 34 مل / دقيقة).
ملاحظه: يوصى باستخدام حامل الرأس المضمن في هذا الإعداد التجسيمي فقط للفئران البالغة. تأكد من اتباع توصيات الشركة المصنعة المضمنة في الإعداد التجسيمي.
- تأكد من توصيل مخدر مناسب (على سبيل المثال ، الأيزوفلوران) المملوء مسبقا في المحقنة بجهاز التخدير (الشكل 1 ب).
ملاحظه: يمكن أن يتسبب الإفراط في تحضير المحقنة في توصيله إلى الكثير من التخدير إلى الفئران أثناء الجراحة ويؤدي إلى جرعة زائدة من التخدير.
- قم بإعداد التدريبات عن طريق لف قفل المرحلة ، وإدخال محول مثقاب ومثقاب 1 مم في كل مثقاب وقفل المثقاب عن طريق شد قفل البت يدويا.
- قم بإرفاق التدريبات على الإطارات التجسيمية (الشكل 1C).
2. ضع الفئران على إطارات تجسيمية
- تخدير الفئران (على سبيل المثال ، الأيزوفلوران) باستخدام غرفة الحث المذكورة أعلاه.
- حافظ على الفئران طوال العملية في مستوى مخدر عميق. تعتمد نسبة التخدير التي تديرها الآلة على عدد من العوامل بما في ذلك: معدل التدفق ودرجة التحفيز ودرجة حرارة الجسم. مراقبة الفئران بشكل متكرر طوال العملية لعمق التخدير من خلال تقييم التنفس الإيقاعي (لا يلهث). عدم وجود منعكس الجفن (رفرفة الجفون عند تحفيزها باستخدام قضيب طرف قطني) ؛ وعدم وجود قرصة إصبع القدم (سحب الطرف على الحافز الضار لقرص أصابع القدم).
ملاحظه: سيكون لسلالات الفئران المختلفة استجابة مختلفة للتخدير.
- بعد أن تكون الفئران في مستوى مخدر عميق مناسب ، انقل الفئران إلى الوحدة التجسيمية. استخدم وسادة تدفئة أثناء وجود الماوس على الجهاز التجسيمي للحفاظ على درجة حرارة الجسم ومستوى تخدير مناسب.
ملاحظه: لتحقيق المظهر الجانبي المنخفض ، نستخدم تدفئة اليد التي يتم تنشيطها بالهواء موضوعة داخل صندوق طرف ماصة مقلوب (صندوق رفع الماوس في الشكل 1D).
- افتح فم الماوس وضع الأسنان في حوض شريط الفم الموجود على قطعة الأنف على الإطار التجسيمي (الشكل 2 أ). حرك مخروط الأنف فوق أنف / فم الفأر (الشكل 2 ب).
- ضع الفئران مع وضع رؤوسها على شريط الفم. افتح الفم برفق بالطرف الحاد لقضيب القطن وانزلق في مكانه. تأكد من أن مخروط الأنف فوق أنف الفأر بالكامل وإلا فلن يتم توصيل التخدير بشكل صحيح. لن يتفاعل مخروط الأنف مع الأنف إذا لم تكن الأسنان جالسة داخل هذا الأخدود (الشكل الداخلي 2 أ).
- باستخدام قطعة قطن معقمة ، ضع مادة تشحيم العين على كل من عيني الفأر. يخفف تطبيق زيوت تشحيم العين من جفاف القرنية ويقلل من فرصة تلف القرنية ومضاعفات ما بعد الجراحة المتعلقة بصدمة القرنية.
- قم بتثبيت جمجمة الماوس عن طريق الضغط على شريط الأذن الأيسر مقابل الكانثوس الإنسي للأذن اليسرى ، وتثبيته في مكانه باستخدام المسمار الموجود على الإطار التجسيمي. بعد ذلك ، حرك شريط الأذن الأيمن مقابل الكانثوس الإنسي للأذن اليمنى وقم بتثبيته بإحكام على الإطار التجسيمي (الشكل 2 ب).
ملاحظه: تأكد من أن رأس الماوس مستو ومستقيم عند وضع قضبان الأذن. إذا كان الرأس ملتويا أو مائلا ، فسيكون الحقن في المكان غير الصحيح في الدماغ. يجب شد قضبان الأذن فقط حتى يتم تثبيت الجمجمة عند التحفيز باستخدام الفحص اليدوي المعتدل.
3. قم بعمل نافذة جلجلية
- قم بإعداد وتنظيف فروة الرأس باستخدام 3 مرات بالتناوب لكل من محلول البيتادين و 70٪ إيثانول. نظرا لقرب موقع الجراحة من العينين ، استخدم محلول البيتادين فوق المقشر الجراحي.
- باستخدام مشرط معقم ، قم بعمل شق 3 مم عبر الجلد على طول الجانب المتوسط المركزي للجمجمة (بعد خط الخياطة السهمية). يجب أن يكون النزيف عند الشق ضئيلا. في حالة حدوثه ، استخدم ضغطا ثابتا وثابتا في موقع النزيف باستخدام قضيب طرف قطني معقم لمدة >30 ثانية.
- حدد وقم بتوجيه المثقاب بشكل عمودي على بريجما (الشكل 2C) ، مع التأكد من إعادة ضبط مقياس Vernier الرقمي إلى الصفر.
- حرك المثقاب 2 مم جانبيا إلى الخيط السهمي و 1 مم أمام الخيط الإكليلي (الشكل 2 ج). من أجل التكاثر ، تأكد من أن الموقع الموجود على يسار أو يمين خط الخياطة السهمية يظل ثابتا لجميع.
- اقلب المثقاب على أعلى سرعة. تأكد من إبعاد الجلد عن المثقاب لتجنب تلف الأنسجة الناجم عن اللقمة الدوارة وابدأ المثقاب بعناية على الجمجمة. احفر حفرة بعمق 0.5 مم تقريبا من خلال الجلجلة ، مما ينتج عنه نافذة الجلالة. احرص على عدم خفض المثقاب كثيرا وإلا فسوف يحفر في الدماغ. يمكن أن يؤدي إسقاط المحلول الملحي المعقم في موقع الحفر أثناء حركة المثقاب إلى تعويض أي حرارة تولدها الماكينة والتي قد تسبب أضرارا حرارية للأنسجة المحيطة.
- بمجرد عمل النافذة التجسيمية ، ارفع المثقاب بعناية وقم بإزالته من الإطار التجسيمي.
- نظف لقم الثقب باستخدام 70٪ من الإيثانول واتركه جانبا إذا تم استخدامه مرة أخرى. إذا لم يكن الأمر كذلك ، فقم بإزالة لقم الثقب واغمرها في 70٪ من الإيثانول.
