الحفظ بالتبريد لدماغ الفئران عن طريق التجميد المفاجئ: تقنية لتجميد عينة دماغ الفأر الكاملة بسرعة للتحليل النسيجي

الملخص

المصدر: Comba، A. et al. التشريح المجهري لالتقاط الليزر للمناطق الفرعية للورم الدبقي من أجل التوصيف المكاني والجزيئي لعدم التجانس داخل الورم ، والتيارات الورمية ، والغزو. J. Vis. إكسب. (2020)

يوضح هذا الفيديو الحفظ بالتبريد لدماغ الفأر لعزل المناطق التشريحية المنفصلة أو مجموعات خلايا معينة من أنسجة الورم. هذه التقنية ضرورية في الحصول على الدقة البصرية المثلى لمورفولوجيا أنسجة المخ للتحليل اللاحق.

البروتوكول

فئة

1. الحفظ بالتبريد للأدمغة التي تؤوي أورام الورم الدبقي

1. قبل حفظ الأدمغة بالتبريد، قم بإعداد برطمان مملوء بالأيزوبنتان البارد/2-ميثيل بيوتان وضعه في وعاء مملوء بالنيتروجين السائل. دع المذيب يبرد.
2. أخرج الدماغ من محلول السكروز بنسبة 30٪ وامسحه حتى يجف على ورق ترشيح.
3. قم بتسمية cryomold بعلامة دائمة. أضف بعناية ما يقرب من 5 مل من OCT (مركب درجة حرارة القطع الأمثل) في وسط CRYOOLD لتجنب فقاعات الهواء.
4. ضع الدماغ في CROMOLD يحتوي على OCT في الاتجاه المطلوب. املأ القالب ب OCT حتى يغمر الدماغ بالكامل. باستخدام ملقط نظيف ، ضع المبرد بسرعة مع OCT والدماغ في الأيزوبنتان البارد / 2-ميثيل بوتان.
5. بمجرد أن يصلب OCT (~ 30-40 ثانية) ، قم بإزالة التبريد مع الدماغ وضعه في الثلج الجاف. لا تترك القالب الذي يحتوي على الدماغ في 2-ميثيل بوتان بعد دقيقتين لأن هذا قد يتسبب في حدوث تشققات في OCT الصلب. لف التبريد بالدماغ بورق الألمنيوم وقم بتخزينه عند -80 درجة مئوية.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات قشر قوالب التضمين التي يمكن التخلص منها علوم المجهر الإلكتروني 70182 أبحاث Cryostat لايكا CM3050s مركب O.C.T. الأنسجة الإضافية فيشر ساينتيك 23-730-571