تقسيم أنسجة دماغ الفئران المجمدة: إجراء للحصول على أقسام رقيقة من الأنسجة المجمدة من أنسجة دماغ الفئران المجمدة

الملخص

المصدر: Comba، A. et al. التشريح الدقيق لالتقاط الليزر للمناطق الفرعية للورم الدبقي للتوصيف المكاني والجزيئي لعدم التجانس داخل الورم ، والتيارات الورمية ، والغزو. J. Vis. Exp. (2020)

في هذا الفيديو ، نوضح تقسيم أنسجة ورم دماغ الفأر المجمدة باستخدام ناظم البرد. يتم تخزين أقسام أنسجة المخ المجمدة التي تم الحصول عليها على هذا النحو في درجات حرارة منخفضة حتى مزيد من التحليل.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. تقطيع أنسجة أورام الدماغ المجمدة

1. قم بتسمية 2 ميكرومتر من البولي إيثيلين نفثاليت (PEN) مع معلومات العينة. سيتم وضع أقسام الأنسجة مباشرة على هذه الشرائح بعد التقسيم.
2. اضبط درجة حرارة غرفة التبريد بين -20 إلى -24 درجة مئوية. قبل التقسيم ، ضع كتلة العينة في غرفة التبريد واتركها تتوازن مع درجة الحرارة في الغرفة لمدة 30-60 دقيقة.
3. نظف حجرة ناظم البرد وحامل السكين بالإيثانول بنسبة 100٪ ورش الفرش لاستخدامها مع محلول تنظيف RNase. العمل داخل حجرة ناظم البرد ، قم بإزالة القالب ....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات شريحة زجاجية غشائية PEN (2 ميكرومتر) ليكا 1150518 أبحاث Cryostat لايكا CM3050s حل إزالة التلوث RNaseZap RNase فيشر ساينتيك AM9780 قشر قوالب التضمين التي يمكن التخلص منها علوم المجهر الإلكتروني 70182 الحل الدقيق زيمو للأبحاث د3001-1 مركب O.C.T. الأنسجة الإضافية فيشر ساينتيك 23-730-571