تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. تقطيع أنسجة أورام الدماغ المجمدة
- قم بتسمية 2 ميكرومتر من البولي إيثيلين نفثاليت (PEN) مع معلومات العينة. سيتم وضع أقسام الأنسجة مباشرة على هذه الشرائح بعد التقسيم.
- اضبط درجة حرارة غرفة التبريد بين -20 إلى -24 درجة مئوية. قبل التقسيم ، ضع كتلة العينة في غرفة التبريد واتركها تتوازن مع درجة الحرارة في الغرفة لمدة 30-60 دقيقة.
- نظف حجرة ناظم البرد وحامل السكين بالإيثانول بنسبة 100٪ ورش الفرش لاستخدامها مع محلول تنظيف RNase. العمل داخل حجرة ناظم البرد ، قم بإزالة القالب وإرفاق كتلة OCT التي تحتوي على الدماغ بقرص عينة ناظم البرد باستخدام OCT. ضع الكتلة في حامل القرص وقم بمحاذاة الكتلة مع شفرة السكين.
- قم بتركيب شفرة يمكن التخلص منها في حامل التقسيم.
- قسم الدماغ بسمك 10 ميكرومتر. تأكد من عدم وجود خطوط أو خطوط خدش في الأنسجة. باستخدام فرشاة الرسم ، قم بتسطيح الأنسجة وفكها بحذر على سطح القطع.
قم - بتركيب الأنسجة التي تحتوي على أقسام الدماغ بعناية على شرائح زجاجية PEN خالية من RNase. اقلب الشرائح الزجاجية الموجبة الشحنة بالأصابع في اتجاه الأنسجة واضغط بسلاسة على الشريحة الزجاجية لأسفل باتجاه قسم الأنسجة.
ملاحظه: ستساعد درجة حرارة اليدين الأنسجة على الالتصاق بالزجاج.
- بعد تركيب أقسام الدماغ على الشرائح ، احتفظ بالشرائح في صندوق داخل غرفة ناظم البرد ثم قم بتخزينها عند -80 درجة مئوية. لا تحتفظ أبدا بالشرائح في درجة حرارة الغرفة.
ملاحظه: طي الأنسجة والتمزق شائعان. من أجل التحليل اللاحق الدقيق ، من المهم تقليل هذه القطع الأثرية.