Method Article

عزل الخلايا أحادية النواة عن دماغ الفأر: تقنية الطرد المركزي المتدرج للكثافة لعزل الخلايا أحادية النواة المقيمة في الدماغ

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Ji ، Z. et al. تحليل قياس التدفق الخلوي لتسلل الخلايا الليمفاوية في الجهاز العصبي المركزي أثناء التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي. J. Vis. إكسب. (2020)

في هذا الفيديو ، نقوم بعزل الخلايا أحادية النواة من دماغ الفأر باستخدام الطرد المركزي المتدرج للكثافة. يمكن استخدام تعليق الخلية أحادية النواة المعزول لمزيد من التحليل النهائي.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. تحضير تعليق خلية واحدة من الدماغ

  1. وسط تدرج الكثافة المخفف بنسبة 9: 1 مع PBS في أنبوب مخروطي 15 مل لإنتاج محلول نهائي بنسبة 100٪.
  2. تخدير الفئران في ذروة EAE بحقن داخل الصفاق بنسبة 1٪ بنتوباربيتال الصوديوم (50 مجم / كجم) وتصفيه داخل القلب مع 20 مل من PBS المعقم المثلج. حقق ذلك عن طريق حقن PBS ببطء وثبات في البطين الأيسر للقلب باستخدام حقنة سعة 20 مل وفتح الأذين الأيمن.
  3. اقطع الجمجمة بعناية من الأنف إلى الرقبة ، ثم قم بإزالة الدماغ من صندوق الجمجمة إلى 10 مل من RPMI في أ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
الشكل 1: تخطيطي لإعداد التدرج Percoll لعزل الخلايا أحادية النواة.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments الخالط Dounce ويتون 353107542 بيركول جنرال الكتريك 17-0891-01

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Mononuclear Cell IsolationDensity Gradient CentrifugationBrain Resident CellsLymphocyte InfiltrationTissue HomogenizationCell Pellet FormationInterface Layer CollectionMyelin RemovalRPMI MediumBasement Membrane Matrix

Related Articles