عزل الخلايا أحادية النواة عن دماغ الفأر: تقنية الطرد المركزي المتدرج للكثافة لعزل الخلايا أحادية النواة المقيمة في الدماغ

الملخص

المصدر: Ji ، Z. et al. تحليل قياس التدفق الخلوي لتسلل الخلايا الليمفاوية في الجهاز العصبي المركزي أثناء التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي. J. Vis. إكسب. (2020)

في هذا الفيديو ، نقوم بعزل الخلايا أحادية النواة من دماغ الفأر باستخدام الطرد المركزي المتدرج للكثافة. يمكن استخدام تعليق الخلية أحادية النواة المعزول لمزيد من التحليل النهائي.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. تحضير تعليق خلية واحدة من الدماغ

1. وسط تدرج الكثافة المخفف بنسبة 9: 1 مع PBS في أنبوب مخروطي 15 مل لإنتاج محلول نهائي بنسبة 100٪.
2. تخدير الفئران في ذروة EAE بحقن داخل الصفاق بنسبة 1٪ بنتوباربيتال الصوديوم (50 مجم / كجم) وتصفيه داخل القلب مع 20 مل من PBS المعقم المثلج. حقق ذلك عن طريق حقن PBS ببطء وثبات في البطين الأيسر للقلب باستخدام حقنة سعة 20 مل وفتح الأذين الأيمن.
3. اقطع الجمجمة بعناية من الأنف إلى الرقبة ، ثم قم بإزالة الدماغ من صندوق الجمجمة إلى 10 مل من RPMI في أ....

النتائج

الشكل 1: تخطيطي لإعداد التدرج Percoll لعزل الخلايا أحادية النواة.

....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات الخالط Dounce ويتون 353107542 بيركول جنرال الكتريك 17-0891-01