حاجز الورم الدموي في الدماغ أو نموذج BBTB: تكيف الحاجز الدموي الدماغي أو نموذج BBB لتقييم توصيل العلاجات للورم

الملخص

المصدر: Le Joncour، V. et al. التنبؤ بتسليم الحمولات في الجسم الحي باستخدام حاجز ورم الدم الدماغي في طبق.

في هذا الفيديو ، نصف بروتوكولا شاملا لإنشاء نموذج في المختبر يحاكي حاجز الورم الدموي في الدماغ. يبشر النموذج بفهم تقديم العوامل العلاجية لعلاج أورام الدماغ.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. إنشاء BBTB Mimics

ملاحظة: تم تفصيل وسط زراعة الخلايا والمكملات الغذائية في جدول المواد.

1. تحضير الخلايا النجمية
   ملاحظه: المجلدات التالية مناسبة لطبق بتري مقاس 10 سم أو قارورة ثقافة خلية T75.
   1. تحت غطاء زراعة الخلايا المعقم ، اغسل الخلايا النجمية المستزرعة بعناية باستخدام 5 مل من محلول ملحي معقم مخزن بالفوسفات (PBS). تخلص من PBS برفق باستخدام مضخة تفريغ وأضف 2 مل من كاشف ....

النتائج

الشكل 1: وصف نموذج حاجز الورم الدموي في الدماغ (BBTB).(أ) التمثيل التخطيطي لمواقع أنواع الخلايا المختلفة. (ب) رسم توضيحي لموضع الإدخال على غطاء اللوحة المكون من 6 آبار وتقنية البذر للخلايا النجمية على جانب الدماغ من غشاء الإدخال. (ج) رسم توضيحي لوضع الصفيحة المكونة من 6 آبار مما يسمح بالتصاق الخلايا النجمية. (د) صور مجهرية مناعية لبروتينات التوصيل الضيقة zonula occludens.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات خلايا باند3 ATCC علامة الإقليم - 2299 مستنبت: DMEM (1 جم / لتر جلوكوز) مكمل بنسبة 10٪ FBS - 5 مل من L-glutamine و 5 مل بنسلين / ستربتومايسين الخلايا النجمية الخلدة للفأر HIFko معزولة في مختبر الدكتور غابرييل بيرجرز https://doi.org/10.1016/ S1535-6108 (03) 00194-6 مستنبت: BME-1 مكمل ب 5٪ FBS- 5 مل 1 M HEPES-5 مل 100 ملي بيروفات الصوديوم - 3 جم D-glucose و 5 مل بنسلين / ستربتومايسين هوAR2T معزول في مختبر الدكتور داغمار ويرث https://doi.org/10.1089/ten.tea.2009.0184 مستنبتة في: EBM-2 مع مكملخلط الخلايا النجمية الأولية البشرية الطبيعية Lonza CC-2565 مستنبتة في: ABM مع SingleQuots المواد والكواشف 100 مم × 17 مم طبق Nunclon Delta ثيرموفيشر العلمي هاتف 150350 10 مل ماصة مصلية ثيرموفيشر العلمي 170361 15 مل أنابيب الطرد المركزي المعقمة المخروطية من مادة البولي بروبيلين ثيرموفيشر العلمي 339650 ABM بازال متوسط 500 مل لونزا سي سي -3187 للخلايا النجمية البشرية الأولية. ABM+: يحتوي على جميع الإضافات من مزيج المكملات الغذائية. ABM-: جميع المواد المضافة باستثناء rhEGF و FBS محلول انفصال خلية Accutase كورنينج 25-058-CI AGM SingleQuots المكملات الغذائية وعوامل النمو لونزا CC-4123 مكمل B27 جيبكو 17504-044 لكل من GBM + و - متوسط النسر القاعدي المتوسط ثيرموفيشر العلمي 21010046 BME-1 لوحات Corning Costar TC المعالجة ب 6 آبار سيجما ألدريتش CLS3506 إدراج ثقافة خلايا غشاء البوليستر Corning Transwell سيجما ألدريتش CLS3452 د-الجلوكوز سيجما ألدريتش G8270 يذوب في 50 مل من BME-1 والفلتر المعقم قبل إضافته إلى الوسط Dulbecco's Modified Eagle's Medium / Nutrient F-12 Ham جيبكو هاتف: 21331-020 خاص بثقافة المجالات المشتقة من المريض المعزولة في مختبرنا ؛ قد تختلف باختلاف خطوط خلايا الورم الدبقي الأخرى مكمل النمو EBM-2 المتوسطمزيج PromoCell ج -39216 EBM +: يحتوي على جميع الإضافات من مزيج المكملات الغذائية. EBM-: جميع المواد المضافة باستثناء VEGF-A و FBS الوسط القاعدي البطاني 2 (EBM-2) PromoCell سي -22211 EBM +: يحتوي على جميع الإضافات من مزيج المكملات الغذائية. EBM-: جميع المواد المضافة باستثناء VEGF-A و FBS مصل الأبقار الجنينية (FBS) ، مؤهل ، معطل بالحرارة ، معتمد من الاتحاد الأوروبي من أصل أمريكا الجنوبية ثيرموفيشر العلمي 10500056 ملح الصوديوم الفلورسين سيجما ألدريتش F6377 Greiner CELLSTAR 96 ألواح بئر سيجما ألدريتش غرينر 655090 آبار البوليسترين الأسود ذات قاع مسطح (مع قاع دقيق الشفاف) Menzel-Gläser 0.9 سم غطاء البورسليكات المستدير زلات الترمو: العلمية 10313573 أقراص PBS فصه 09-9400-100 قرص واحد لكل لتر من dH2O ؛ ثم تعقيم المحلول عن طريق التعقيم بولي د-ليسين هيدروبروميد سيجما ألدريتش ص 6407 EGF البشري المؤتلف بيبروتك GMP100-15 بالنسبة إلى GBM+ المتوسطة FGF البشري المؤتلف الأساسي (154 أ) بيبروتك 100-18 ب بالنسبة إلى GBM+ المتوسطة