عزل خلايا الدماغ من يرقات الزرد: تقنية للحصول على الخلايا العصبية السليمة والضامة والخلايا الدبقية الصغيرة من أنسجة دماغ أسماك الزرد

الملخص

المصدر: Mazzolini، J. et al. عزل واستخراج الحمض النووي الريبي للخلايا العصبية والضامة والخلايا الدبقية الصغيرة من أدمغة اليرقات الزردية. J. Vis. Exp. (2018)

يصف هذا الفيديو بروتوكولا لعزل الخلايا العصبية والضامة والخلايا الدبقية الصغيرة من أدمغة يرقات أسماك الزرد عن طريق تعطيل أنسجة المخ ميكانيكيا. يمكن أيضا استخدام مجموعات الخلايا المنقاة للتحليل الجيني.

البروتوكول

تم تنفيذ جميع الإجراءات التي تشمل مشاركين بشريين وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية والوطنية والدولية لرفاه الإنسان وتم استعراضها من قبل مجلس المراجعة المؤسسية المحلي.

< p class = "jove_title" >1. التجانس

ملاحظة: يتم تنفيذ جميع الخطوات 4 درجات مئوية.

1. أضف 1.5 مل من التريكايين (15 ملم) إلى أطباق بتري 90 مم تحتوي على 50 يرقة في 50 مل من وسط الجنين E3 المعالج ب 200 ميكرومتر PTU لتخديرها بشكل نهائي.
   1. امتصاص 10 يرقات مخدرة من أطباق بتري باستخدام ماصة بلاستيكية سائبة سعة 3 مل من باستور.
   2. انقل اليرقات المخدرة 10 × 10 إلى طبق بتري مقاس 55 مم مملوء بوسط جنين E3 المثلج + Tricaine....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 1-فينيل 2-ثيوريا (PTU) سيغما ص 7629 هيبس جيبكو هاتف: 15630-056 د-جلوكوز سيغما G8644-100 مل HBSS 1X جيبكو 14170-088 بيركول جنرال إلكتريك للرعاية الصحية 17-0891-02 HBSS 10X جيبكو 14180-046 DPBS 1X جيبكو 14190-094 التريكايين (MS222) سيغما أ 5040 أطباق بتري قياسية 90 مم من الستريلين ثيرموفيشر 101 فير مقص دقيق جراحي أدوات العلوم الدقيقة 15000-00 3 مل ماصة بلاستيكية باستور SLS PIP4206 الخالط الزجاجي ويتون 357538 أطباق بتري قياسية 55 مم من Sterilin ثيرموفيشر P55V بيركول جنرال إلكتريك للرعاية الصحية 17-0891-02 مصفاة خلية 40 ميكرومتر صقر هاتف: 352340 50 مل أنبوب مخروطي بولي بروبيلين صقر 352070 الطرد المركزي إيبندورف 5804 ص مصل الماعز العادي (NGS) إشارات الخلية 5425 ثانية غطاء مصفاة خلية 35 ميكرومتر دينار بحريني 352235