عزل الخلايا الدبقية الصغيرة عن طريق فرز الخلايا المقترنة بالتلوين المناعي: طريقة تلبوخية مناعية لعزل الخلايا الدبقية الصغيرة من خلايا دماغ أسماك الزرد باستخدام فرز الخلايا المنشطة بالفلورسنت

الملخص

المصدر: Mazzolini، J. et al. العزل واستخراج الحمض النووي الريبي للخلايا العصبية والضامة والخلايا الدبقية الصغيرة من أدمغة اليرقات الزردية. J. Vis. Exp. (2018)

< p class = "jove_content" >في هذا الفيديو ، نقوم بعزل الخلايا الدبقية الصغيرة لسمك الزرد عن طريق فرز الخلايا المقترنة بالتلوين المناعي. يمكن استخدام الخلايا الدبقية الصغيرة المعزولة في التجارب النهائية لفهم دورها في أمراض الدماغ.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

فئة < ص = "jove_title" >1. تلطخ المناعة الدبقية

الصغيرة

ملاحظة: يتم تنفيذ جميع الخطوات عند 4 درجات مئوية.

1. أعد تعليق حبيبات الخلية التي تم الحصول عليها من خلايا زراعة الدماغ مع 0.3 مل من الوسائط A + 2٪ مصل الماعز العادي أو NGS. قم بتقسيمها إلى أنابيب 3 × 1.5 مل: واحدة للخلايا غير الملوثة لقياس التألق الذاتي من الخلايا ذات الأهمية ، والثانية للجسم المضاد الثانوي (1/200) لقياس الارتباط غير المحدد للجسم المضاد الثانوي بالخلايا الدبقية الصغيرة ، والثالث كاختبار (الجسم ال....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات هيبس جيبكو هاتف: 15630-056 د-جلوكوز سيغما G8644-100 مل HBSS 1X جيبكو 14170-088 مصل الماعز العادي (NGS) إشارات الخلية 5425 ثانية غطاء مصفاة خلية 35 ميكرومتر دينار بحريني 352235 أنابيب FACS دينار بحريني 352063 منخفض السموم الداخلية ، خالي من الأزيد (LEAF) بيوليجند 101321 أليكسا فلور 647 الماعز المضاد للفأر IgG (H+L) تقنيات الحياة أ 11008 مضاد ل 4C4 بإذن من كاثرينا بيكر (جامعة إدنبرة) فارز FACS FACSAria II دينار بحريني QMRI ، مرفق FACS