مقالة منهجية

نموذج الحلقة اللفائفية للفأر: نموذج جراحي لدراسة نفاذية الأمعاء في الفأر

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Boerner، K.، et al. التقييم الوظيفي لنفاذية الأمعاء والهجرة عبر الظهارة للعدلات في الفئران باستخدام نموذج الحلقة المعوية الموحد. J. Vis. Exp. (2021)

يوضح هذا الفيديو إنشاء نموذج حلقة لفائفي لدراسة نفاذية الأمعاء في نموذج الفأر. توفر هذه الطريقة نموذجا حيا لفهم وظيفة الحاجز الظهاري والاستجابة المناعية اللاحقة.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. توليد الحلقة اللفائفية

  1. تحضير الجلد: افرك فرو خط الوسط البطني بمسحات كحولية أو إسفنجة شاش مبللة بنسبة 70٪ إيثانول. لا تبلل مساحة واسعة من الفراء بالكحول لمنع انخفاض حرارة الجسم.
  2. باستخدام المقص ، قم بإجراء بضع البطن في خط الوسط. قم بعمل شق عمودي في منتصف البطن (طوله حوالي 2 سم) وكشف الصفاق. احرص على عدم إصابة الأعضاء داخل البطن.
  3. ضع شاشا قطنيا مبللا مقطوعا مسبقا فوق التجويف المكشوف داخل البطن.
  4. استخدم مسحات قطنية مبللة لتعبئة القيكوم وإخراجه من الخارج. ضع السيكوم بحذر على شاش القطن المبلل.
    ملاحظه: يتم توطين Caecum في الربع الذيلي الأيسر من تجويف البطن في معظم الفئران بغض النظر عن جنس.
  5. استخدم مسحات قطنية مبللة لتعبئة الدقاق الذي يتم توصيل الجزء الطرفي (الطرف البعيد) به (الشكل 1 ب) وإخراجه برفق من الخلف (الشكل 1 ب).
  6. انشر ما لا يقل عن 6 سم من الدقاق النهائي على شاش القطن المبلل دون تعطيل الأوعية المساريقية وإمدادات الدم. يتم الحفاظ على إمدادات الدم إذا لم يكن هناك نزيف ، وتحافظ الأنسجة على لونها الوردي (الشكل 1 ب).
    ملاحظه: تجنب تجفيف الأنسجة المكشوفة عن طريق الحفاظ على رطوبة الأنسجة طوال الوقت باستخدام HBSS الدافئ (كل 2-3 دقائق) باستخدام حقنة سعة 10 مل متصلة مسبقا بأنبوب تغذية أصفر.
  7. بالقرب من العرعر ، حدد الشريان الرئيسي في المساريق ، الذي يمد الدقاق بالدم. ثم حدد موقعي ربط في المساريق خاليين من الأوعية الدموية الحرجة.
  8. باستخدام ملقط الأنسجة غير الحادة ، أمسك الدقاق الطرفي بإحكام (الأقرب إلى الأعور) وباستخدام ملقط رفيع ، قم بتحريك المساريق لتجنب الأوعية الدموية. ضع خياطة الحرير عبر الثقب واربط عقدة جراحية لإنشاء الربط الأول (الطرف البعيد من الحلقة).
  9. استخدم المسطرة لقياس 4 سم بعيدا عن الرباط الأول وإنشاء الرباط الثاني (الطرف القريب من الحلقة) كما هو مذكور في الخطوة 2.8 (الشكل 1C).
  10. باستخدام مقص ناعم ، قم بقص بعناية بجوار كل ربط لعزل الحلقة اللفائفية التي يبلغ طولها 4 سم ، مع الحفاظ على إمدادات الدم والغشاء المساريقي سليما. < / > ملاحظه: اقطع طرفي الجزء الخارجي من iLoop ، ثم اشطفه برفق كخطوة ضرورية تمنع التداخل مع المحتويات اللمعية (البراز) ، وبالتالي تسهيل تشتت FITC-dexterrn أو المحفزات الكيميائية عبر كامل طول الجزء المعزول بالإضافة إلى السماح بقياس أكثر دقة للكريات البيض عن طريق قياس التدفق الخلوي. يسمح هذا الإجراء أيضا بانتفاخ منتظم للغشاء المخاطي بعد حقن كميات محددة من الكاشف وقابلية أفضل للتكاثر بين.
  11. اغسل محتوى الجزء الحلقة اللفائفي برفق باستخدام HBSS دافئ باستخدام أنبوب تغذية أصفر مرن متصل بحقنة سعة 10 مل.
  12. اربط طرفي الحلقة اللفائفية المتوهجة باستخدام خياطة الحرير.
  13. استخدم حقنة سعة 1 مل مع إبرة 30 جم لحقن 250 ميكرولتر من الكاشف ببطء مثل FITC-dextran أو chemokine في تجويف الأمعاء. سوف تنتفخ الحلقة اللفائفية مما يتسبب في انتفاخ معتدل في الغشاء المخاطي (الشكل 1 د). < / > ملاحظه: حقن الكاشف في تجويف الحلقة على الجانب الآخر من الشريان المساريقي. احرص على عدم سحب الحلقة اللفائفية من أثناء الحقن لتجنب تمزق الأوعية الدموية والحث على النزيف.
  14. باستخدام مسحات قطنية مبللة ، أعد الحلقة اللفائفية برفق ، والدقاق القريب ، والغد
    15. .
  15. استخدم حامل إبرة وملقط تشريحي و 3.0 خيوط حريرية غير قابلة للامتصاص بإبرة قطع عكسية لإغلاق جدار البطن.
  16. ضع في غرفة تخدير منظمة لدرجة الحرارة لفترة الحضانة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
الشكل 1: نموذج الحلقة اللفائفية. (أ) نظرة عامة تخطيطية على نموذج الحلقة اللفائفية. يتم إجراء شق البطن المتوسط على الفئران تحت التخدير ويوضع على لوح جراحة يتم التحكم في درجة حرارته. (ب) إضفاء الطابع الخارجي على القي (*) والدقاق والمساريق. تم تحديد موقعين مناسبين للربط (1،2). (ج) عزل جزء طوله 4 سم: يتم وضع الرباط الأول (1) بالقرب من التقاطع اللفائفي العصبي ، ويتم وضع الرباط الثاني (2) على بعد 4 سم من ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات < td colspan = "4" > المعدات والمواد مسحات الكحول BD دينار بحريني 326895 إبرة BD PrecisionGlide ، 25 جم × 5/8 بوصة دينار بحريني 305122 إبرة BD PrecisionGlide ، 30 جم × 1/2 بوصة دينار بحريني 305106 حقنة 1 مل درنة بدون إبرة دينار بحريني 309659 أنبوب الطرد المركزي 15 مل كورنينج 14-959-53 أ كورنينج 96 بئر صلب من البوليسترين الأسود فيشر ساينتفيك 07-200-592 صحن ثقافة كورنينج غير معالج ، 10 سم MilliporeSigma CLS430588 قضيب طرف قطني (قطعة قطن) ، 6 بوصات ، معقم فيشر ساينتفيك 25806 2WC Dynarex إسفنج شاش محشو بالقطن ، غير معقم ، 2 × 2 بوصة ميدكس 3249-1 مبخر التخدير EZ-7000 (النظام الكلاسيكي ، بما في ذلك وحدات التسخين) أنظمة EZ EZ-7000 موريا مقص فاين FST 14370-22 مرهم Puralube البيطري ، زيوت تشحيم العين المعقمة ديشرا 12920060 ملقط الحلقة (ملقط الأنسجة الحادة) FST 11103-09 روبوز جراحي 4-0 حرير أسود مضفر ، 100 ياردة فيشر ساينتفيك NC9452680 ملقط سيمكين (ملقط تشريحي) FST 1108-13 Sofsilk غير قابل للامتصاص مطلي بخياطة سوداء مضفر من الحرير بحجم 3-0 ، 18 بوصة ، إبرة بطول 19 مم 3/8 قطع عكسي دائري هنري شاين إس إس 694 ملقط الطالب الناعم ، بزاوية FST 91110-10 10 مل حقنة PP / PE بدون إبرة ميليبور سيجما Z248029 أنابيب تغذية صفراء للقوارض 20 جرام × 30 مم إنستيك FTP-20-30 الحلول والمخازن المؤقتة محلول الملح المتوازن من هانكس كورنينج 21-023-السيرة الذاتية محلول ملحي مخمول بالفوسفات بدون كالسيوم ومغنيسيوم كورنينج 21-040-السيرة الذاتية إيزوفلوران الهالوكربون هاتف: 12164-002-25

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Ileal Loop ModelIntestinal PermeabilityMouse ModelSurgical ProcedureMesenteric LigationChemokine InjectionFITC dextran AssayAbdominal IncisionTissue ExteriorizationLoop Flushing

مقالات ذات صلة