تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. التحضير العام قبل الجراحة
- قم بتسريع الفئران لمدة 6 ساعات قبل الجراحة. تم إعطاء طعام الحمية الهلامية قبل 3 أيام من الجراحة وقبل يوم واحد حصريا من الجراحة. تحفيز التخدير في حجرة تحتوي على 5٪ إيزوفلوران (0.4 لتر/دقيقة) وO2 (ثنائي الأكسجين؛ 0.4 لتر/دقيقة). قم بإجراء اختبار قرصة إصبع القدم للتأكد من أن التخدير فعال. يجب تطبيق المسكنات (0.1 ملغ/كغ بوبرينورفين)، والمضادات الحيوية (10 ملغم/كغ ماربوفلوكساسين)، والحركية (1 ملغم/كغ ميتوكلوبراميد) عن طريق الحقن تحت الجلد.
- تخصيص منطقة عمل محددة للعمليات الجراحية (بعيدة عن حركة المرور المختبرية ومراوح التهوية). نظف منطقة الجراحة بمطهرات مخصصة للأسطح الصلبة. ضع وسادة تدفئة على منطقة مساحة العمل للحفاظ على حرارة الفأر أثناء الجراحة. ضع وسادة نظيفة وماصة تحت وسادة التدفئة.
- احلق البطن من القص إلى الحوض باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية. لف بطن الفأر في غلاف بلاستيكي معقم (الشكل 1 أ) وضع الماوس في وضع ضعيف على وسادة التدفئة.
- ضع مرهما بيطري على العينين لمنع الجفاف أثناء التخدير. ضع الفأر في مخروط الأنف وحافظ على التخدير بنسبة 2٪ أيزوفلوران (0.4 لتر / دقيقة) و O2 (0.4 لتر / دقيقة).
- قبل البدء في الجراحة ، ارتد ثوب فحص معقم ، وقبعة تقشير يمكن التخلص منها ، وقناع وجه ، وقفازات معقمة. افتح عبوة معقمة تحتوي على مجموعة أدوات جراحية معقمة ، وهي مطلوبة لجميع خطوات الجراحة. اقطع نافذة في الغلاف البلاستيكي المعقم وقم بتطهير الجلد باستخدام 2 من محاليل بوفيدون اليود المتتالية.
< p class = "jove_title" >
2. Roux-en-Y المجازة المعدية: الإجراء الجراحي
- بضع البطن المتوسط
- تحت مجهر مجهر ومشرط ، قم بإجراء شق خط الوسط من القص إلى منتصف البطن لفتح تجويف البطن (لا تتلف عضلات البطن). احم البشرة بضغط معقم مبلل بمحلول ملحي 37 درجة مئوية (الشكل 1 ب).
- الطرف الصفراوي والبنكرياس والأطراف الهضمية
- إخراج الأمعاء (الشكل 1 ج). قم بقياس 8 سم من البواب وقم بإجراء ربطتين من الأمعاء باستخدام 5.0 خيوط غير قابلة للامتصاص (الشكل 1 د).
- قطع الأمعاء بين الرباطين (الشكل 1E). ضع الطرف القريب من الطرفين في الربع العلوي الأيسر من البطن. ملاحظة: سيتم استخدام هذا كطرف هضمي (الشكل 1F).
- ضع الطرف البعيد للطرفين المواجه للطرف الهضمي 6 سم أسفل الطرف القريب (الشكل 1F).
ملاحظه: سيتم استخدام هذا كطرف صفراوي.
- فغر الصائم الصائم
- قم بقص كل من الطرف القريب وحلقة الأمعاء باستخدام مقص دقيق وقم بإجراء شقين معويين من نفس الطول (الشكل 1G و 1H).
- قم بإجراء مفاغرة جنبا إلى جنب باستخدام خيوط 8.0 غير قابلة للامتصاص. قم بإجراء مفاغرة الجانب الظهري أولا (الشكل 1I) ، متبوعا بمفاغرة الجانب البطني (الشكل 1J).
- قم بلف 2 قطعة قطن مبللة برفق باتجاه كل جانب من مفاغرة المفاغرة للتأكد من أن الخيط مانعة للتسرب. كاملة مع 8.0 خيوط غير قابلة للامتصاص في حالة التسرب.
- فغر المعدة الصائم
- حركي المعدة برفق باستخدام مسحات قطنية مبللة. حرر المعدة من ملحقات النسيج الضام الجانبي الوثيق باستخدام مسحات قطنية مبللة أو مقص دقيق.
قم - بإخراج المعدة برفق بالكامل ، مع وضع ضغط كولاجين مرقئ قابل لإعادة الامتصاص خلف المعدة. قم بإجراء ربط من البواب باستخدام خياطة 5.0 غير قابلة للامتصاص تمر عبر الثرب باستخدام ملقط دقيق منحني (الشكل 1K و 1L).
- اقطع كلا من الجانب البطني من المعدة ، على بعد 1.5 سم من البواب ، والطرف البعيد باستخدام مقص دقيق ، مما يؤدي إلى شقين من نفس الطول (الشكل 1 م).
- قم بإجراء مفاغرة جنبا إلى جنب باستخدام خيوط 8.0 غير قابلة للامتصاص. ابدأ بمفاغرة الجانب الظهري (الشكل 1N) ، ثم قم بإجراء مفاغرة الجانب البطني (الشكل 1O). قم بلف 2 قطعة قطن مبللة برفق باتجاه كل جانب من جوانب المفاغرة للتأكد من أن الخيط مانعة للتسرب. كاملة مع 8.0 خيوط غير قابلة للامتصاص في حالة التسرب.
- إغلاق البطن
- أغلق الطبقة العضلية لجدار البطن باستخدام 5.0 خيوط غير قابلة للامتصاص (الشكل 1P). تقليل التخدير عن طريق تقليل تركيز الأيزوفلوران إلى 1٪. أغلق الجلد باستخدام 5.0 خيوط غير قابلة للامتصاص (الشكل 1Q). يجب تطبيق 25 مل/كغ من المحلول الملحي الدافئ عن طريق الحقن تحت الجلد.
< p class = "jove_title" >
3. الرعاية العامة بعد الجراحة
- أوقف الأيزوفلوران واستمر في تدفق O2 بمقدار 0.8 لتر / دقيقة حتى يستيقظ الماوس تماما. لا تترك الفأر دون رقابة حتى يستعيد السيطرة الحركية ، وهو ما يشير إلى بدء في التحرك حول القفص والقدرة على الوقوف والمشي دون السقوط.
- ضع الماوس (فأر واحد فقط لكل قفص) في حاضنة تحت درجة حرارة 30 درجة مئوية لمدة 5 أيام.
- الحفاظ على مكملات الحديد (0.5 ملغم/كغ/يوم؛ الحقن تحت الجلد) والفيتامينات (800 ملغ/180 مل في الماء) في الفئران RYGB حتى نهاية البروتوكول.
- العودة إلى أطعمة النظام الغذائي الهلامي (حمية جل غنية بالدهون: 10٪ شحم الخنزير ، 10٪ سكر سائل ، 57٪ ماء) لمدة 5 أيام بعد الجراحة. أعد اتباع نظام غذائي صلب بعد 3 أيام من الجراحة.
- حقن البوبرينورفين تحت الجلد (0.1 ملغم/كغ، مرتين يوميا، من اليوم 0 إلى اليوم 3 بعد الجراحة)، ميلوكسيكام (1 ملغم/كغ، من اليوم 0 إلى اليوم 3 بعد الجراحة)، ميتوكلوبراميد (1 ملغم/كغ، من اليوم 0 إلى اليوم 5 بعد الجراحة)، وماربوفلوكساسين (10 ملغم/كغ، من اليوم 0 إلى اليوم 3 بعد الجراحة)