مقالة منهجية

تزجيج أجنة الأرانب باستخدام القش المبرد: تقنية تبريد فائقة السرعة للحفاظ على أجنة الأرانب للتخزين طويل الأمد

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Garcia-Dominguez، X. et al. نقل الأجنة طفيف التوغل وتزجيج الأجنة في مرحلة الجنين المثلى في نموذج الأرانب.

في هذا الفيديو ، نصف إجراء تزجيج أجنة الأرانب المحصودة في مرحلة التطور المرغوبة باستخدام جلايكول الإيثيلين وثنائي ميثيل سلفوكسيد كمواد تبريد والقش المبرد كنظام ناقل. تتمتع الأجنة المزججة بمعدل بقاء مرتفع ويمكن تخزينها لفترة طويلة حتى الاستخدام.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. تزجيج الأجنة

  1. قم بإجراء جميع عمليات التلاعب في درجة حرارة الغرفة (حوالي 22 درجة مئوية) لتقليل سمية محلول التزجيج في درجات حرارة أكثر دفئا.
    ملاحظه: يمكن نقل الأجنة باستخدام ماصة أوتوماتيكية من 0.1 إلى 2 ميكرولتر في هذا البروتوكول ، ولكن يمكن أن تكون الأجهزة المماثلة الأخرى لتحريك الأجنة التي تسحب الحد الأدنى للحجم مناسبة.
  2. تزجيج الأجنة في إجراء إضافة من خطوتين:
    1. ضع الأجنة لمدة دقيقتين في محلول متوازن يتكون من 10٪ (v / v) إيثيلين جلايكول و 10٪ (v / v) ثنائي ميثيل سلفوكسيد مذاب في الوسط الأساسي (BM). (تكوين BM: محلول ملحي مخزن بالفوسفات (DPBS) من Dulbecco مكمل بنسبة 0.2٪ (وزن / حجم) من ألبومين مصل الأبقار)
    2. انقل الأجنة (من الخطوة 1.2.1) لمدة دقيقة واحدة إلى محلول التزجيج الذي يتكون من 20٪ (v / v) إيثيلين جلايكول و 20٪ (v / v) ثنائي ميثيل سلفوكسيد المذاب في BM.
  3. قم بتحميل الأجنة في قش بلاستيكي صغير سعة 0.25 مل (يحتوي على طرف مغلق بسدادة قطنية وطرف مفتوح). يتم تخطيط العملية في الشكل 1.
    1. قم بإقران الطرف المغلق من القش الصغير سعة 0.25 مل مع الموزع الدقيق المناسب (مثل Captroll III).®
    2. استنشق BM حتى 1/3 من طول القشة ، متبوعا بفقاعة هواء صغيرة.
    3. استنشق الأجنة بحجم 40 ميكرولتر من محلول التزجيج ، متبوعا بفقاعة هواء صغيرة أخرى.
    4. شفط BM حتى يصل الجزء السائل الأول (الخطوة 1.3.2) إلى القطن.
    5. أغلق الطرف المفتوح بسدادة قش.
  4. قم بتنفيذ الخطوة 1.2.2 أثناء تنفيذ الخطوة 1.3 لضمان عدم انقضاء أكثر من دقيقة واحدة ، مما قد يكون ساما للأجنة.
  5. اغمر القش الصغير مباشرة في النيتروجين السائل لتحقيق التزجيج.
  6. قم بتخزين القش الصغير في ديوار للنيتروجين للوقت المطلوب.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >figure-results-1
الشكل 1: تخطيط القش المحمل بشكل صحيح. أ) يشير BM إلى وسائط التلاعب بالجنين المستخدمة أثناء التزجيج. يجب تحميل الأجنة في محلول التزجيج. ب) المظهر العياني للقش المحمل مع تفاصيل مكبرة لموضع الجنين. يسمح لنا هذا الجهاز كبير الحجم بتزجيج عدد كبير من الأجنة ، على عكس الأجهزة ذات الحجم الأدنى. علاوة على ذلك ، فإن التعامل مع هذا الجهاز أسهل مقارنة بالأجهزة ذات الحجم الأدنى.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات ألبومين مصل الأبقار (BSA) VWR 332 ريال ثنائي ميثيل سلفوكسيد سيجما ألدريتش W387509 محلول ملحي مخزن بالفوسفات من Dulbecco (DPBS) سيجما ألدريتش د5773 بدون كلوريد الكالسيوم. الإيثيلين جلايكول سيجما ألدريتش هاتف 102466 م النيتروجين السائل اير سليمع P1505XXX قش بلاستيكي 0.25 مل IMV - التقنيات 6431 ريال مجهر مجسمة لايكا MZ16F هناك خيارات أرخص مثل Leica MZ8 أو Nikon SMZ-10 أو SMZ-2B ، على سبيل المثال لا الحصر. قابس القش IMV - التقنيات 6431 ريال

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

DMSO

مقالات ذات صلة