phiC31-تكامل الجينات المعدلة وراثيا الموجه بوساطة الموقع: تقنية حقن مجهري لتكامل الجينات المعدلة وراثيا في ناقل الأنوفيليس

الملخص

< p class = "jove_content" >المصدر: Adolfi ، A. ، Lynd ، A. ، Lysett ، G. J. ، James ، A. A. التكامل بوساطة φC31 الموجه بالموقع وتبادل الكاسيت في نواقل الأنوفيليس للملاريا. J. Vis. Exp. (2021).

في هذا الفيديو ، نوضح تكامل الجينات المعدلة وراثيا الخاص بالموقع بوساطة phiC31 في جنين Anopheles عن طريق الحقن المجهري. تساعد هذه الطريقة في إدخال الجينات المرغوبة في نظام مضيف للبحث والتطبيقات الصناعية.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. تحضير البلازميدات لمزيج الحقن المجهري

< p class = "jove_content" >ملاحظة: يتضمن البروتوكول الموضح هنا استخدام اثنين من البلازميدات: attB (موقع التعلق المشتق من البكتيريا المضيفة) - بلازميد متبرع يحمل الجين المعدل المعني ، وبلازميد مساعد يعبر عن φC31 integrase بموجب تنظيم ذبابة الفاكهة Hsp70 المحفز.

1. قم بتنقية البلازميدات المانحة والمساعدة باستخدام مجموعة تنقية البلازميد الخالية من السموم الداخلية.
   ملاحظه: تسلسل مستحضر البلازميد النهائي المستخدم للحقن للتحقق من سلامة جميع المكونات.
2. اجمع بين الكميات المناسبة من البلازميدين للحصول على مزيج بتركيز نهائي يبل....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 1.5 مل أنابيب eppendorf مجموعة ماكسي بلازميد EndoFree (10) كياجين هاتف 12362 الإيثانول ، المطلق ، درجة البيولوجيا الجزيئية زيت الهالوكربون 27 سيغما H8773 زيت الهالوكربون 700 سيغما H8898 أطباق بتري كلوريد البوتاسيوم كلوريد الصوديوم فوسفات الصوديوم ثنائي القاعدة محلول أسيتات الصوديوم (3 م) ، درجة الحموضة 5.2 ثيرمو فيشر العلمي (تقنيات الحياة) التوصية 1181 فرشاة مستقرة مقاس 0