تعطيل الجينات المستهدفة المستندة إلى نظام CreER-LoxP: نظام إعادة تركيب Cre المحفز للتاموكسيفين للضربة القاضية للجين المستهدف في نموذج الفأر

الملخص

المصدر: Hubner، E. K.، et al. الأنظمة التأسيسية والتحفيزية للتعديل الجيني في الجسم الحي لخلايا الكبد في الفئران باستخدام حقن وريد الذيل الهيدروديناميكي.J. Vis. Exp. (2018)

يصف هذا الفيديو إجراء للضربة القاضية للجين المستهدف باستخدام نظام Cre-recombinase المحفز للتاموكسيفين بعد الحقن داخل الصفاق للتاموكسيفين في نموذج الفأر.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. تحريض CreER المنقول مع تاموكسيفين

تنبيه: تاموكسيفين ضار أو قد يكون سرطانيا أو يضر بالخصوبة. يرجى الرجوع إلى ورقة بيانات السلامة.

1. خطط لحقن تاموكسيفين داخل الصفاق في ثلاثة أيام متتالية.
2. في اليوم 1 ، قم بإذابة 10 مجم من تاموكسيفين في 40 ميكرولتر من الإيثانول. احتضان عند 55 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. دوامة عدة مرات حتى يذوب التاموكسيفين.
3. أضف 960 ميكرولتر زيت الذرة. احتضن لمدة 5 دقائق عند 55 درجة مئوية. دوامة عدة مرات للحصول على حل واضح.
4. تحضير المحلول في حقنة الأنسولين سعة 1 مل بإبرة 27 جرام.
قم
5. بتقطيع الماوس عن طريق الإمساك برقبة الماوس بعناية بالإبهام والإصبع الثاني ، وتثبيت الذيل بين قاعدة اليد والإصبع الرابع والخامس.
6. حقن 0.1 مل (= 1 مجم من تاموكسيفين) من المحلول داخل الصفاق في الربع السفلي الأيسر من البطن.
7. كرر الحقن في اليومين الثاني والثالث.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات حقنة إنجيكت F 1 مل براون 9166017 فولت للحقن داخل الصفاق تاموكسيفين سيجما ألدريتش تي 5648-1 جي لتنشيط CreER زيت الذرة سيجما ألدريتش C8267-500 مل حامل لحقن تاموكسيفين