مقالة منهجية

الكروماتوغرافيا السائلة للتفاعل الماء: تقنية لفصل التحليلات القطبية المحبة للماء باستخدام الخرز المحبة للماء

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Liu، D.، et al. تحليل الغلوبولين المناعي G N-Glycan بواسطة الكروماتوغرافيا السائلة فائقة الأداء. J. Vis. Exp. (2020).

يوضح هذا الفيديو مبدأ فصل المركبات القطبية المحبة للماء باستخدام الكروماتوغرافيا السائلة للتفاعل المحبة للماء. تساعد هذه التقنية في تنقية التحليلات القطبية المختلفة ، بما في ذلك N-glycans.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_title" >1. كروماتوغرافيا التفاعل المحبة للماء وتحليل الجليكان

  1. تكييف أدوات UPLC وإعداد المراحل المتنقلة
    1. تحضير المراحل المتنقلة بما في ذلك المذيب أ: 100 ملي مولار فورمات الأمونيوم (الرقم الهيدروجيني = 4.4) ، المذيب ب: 100٪ أسيتونيتريل ، المذيب C: 90٪ ماء فائق النقاء (10٪ ميثانول) ، والمذيب D: 50٪ ميثانول (ماء فائق النقاء).
    2. افتح البرنامج للتحكم في مراحل الهاتف المحمول.
    3. اغسل أدوات UPLC بمعدل تدفق 0.2 مل / دقيقة (50٪ مذيب B و 50٪ مذيب C) موازنة لمدة 30 دقيقة ، ثم بمعدل تدفق 0.2 مل / دقيقة (25٪ مذيب A و 75٪ مذيب B) موازنة لمدة 20 دقيقة ، ثم توازن معدل تدفق 0.4 مل / دقيقة.
  2. قم بإذابة N-glycans المسمى مسبقا ب 2-aminobenzamide (2-AB) في 25 ميكرولتر من خليط من الأسيتونيتريل بنسبة 100٪ وماء فائق النقاء بنسبة 2: 1 (حجم / حجم). ثم ، جهاز الطرد المركزي عند 134 × جم لمدة 5 دقائق (4 درجات مئوية) وقم بتحميل 10 ميكرولتر من N-glycans المسمى في أدوات UPLC.
  3. افصل N-glycans المسمى بمعدل تدفق 0.4 مل / دقيقة مع تدرج خطي من 75٪ إلى 62٪ أسيتونيتريل لمدة 25 دقيقة. بعد ذلك ، قم بإجراء تشغيل تحليلي بواسطة سلم معايرة ديكستران / عمود جليكوببتيد على UPLC عند 60 درجة مئوية (هنا ، تم الاحتفاظ بالعينات عند 4 درجات مئوية قبل الحقن).
  4. اكتشف مضان N-glycan عند أطوال موجات الإثارة والانبعاث 330 نانومتر و 420 نانومتر ، على التوالي.
  5. دمج الجليكان بناء على موضع الذروة ووقت الاحتفاظ.
  6. احسب القيمة النسبية لكل ذروة جليكان (GP) / جميع قمم الجليكان (GPs) (النسبة المئوية ، ٪) على النحو التالي: GP1: GP1 / GPs * 100 ، GP2: GP2 / GPs * 100 ، GP3: GP3 / GPs * 100 ، إلخ.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 2-أمينوبنزاميد ، 2-AB سيجما ، الصين أسيتونيتريل Huihai Keyi التكنولوجيا المحدودة ، الصين فورمات الأمونيوم بكين مينرويدا التكنولوجيا المحدودة سلم معايرة ديكستران / عمود الجليكوببتيد شركة واتس للتكنولوجيا المحدودة ، الصين إمباور 3.0 شركة ووترز تكنولوجي المحدودة ، أمريكا طقم وضع العلامات GlycoProfile 2-AB سيجما ، الصين ميثانول Huihai Keyi التكنولوجيا المحدودة ، الصين عداد المياه النقية Milli-Q شركة Millipore المحدودة ، أمريكا 202-2 أب نقل مسدس السائل سمر للعلوم والتكنولوجيا المحدودة ، الصين ميزة A10 ثلاجة بدرجة حرارة منخفضة للغاية شركة ثيرمو المحدودة ، أمريكا PB-10 كروماتوغرافيا سائلة فائقة الأداء شركة واتس للتكنولوجيا المحدودة ، الصين مضخة فراغ شركة واتس للتكنولوجيا المحدودة ، الصين 4672100 ، 0.5-10 ميكرولتر & 10-100 ميكرولتر & 20-200 ميكرولتر & 1000 ميكرولتر

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

HILIC N Glycan UPLC

مقالات ذات صلة