Method Article

التوليد في المختبر للخلايا المتغصنة البلازمية من الأسلاف اللمفاوية الشائعة

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Chang ، S. ، et al. في المختبر التوليد من الخلايا المتغصنة البلازمية الفئرانية من أسلاف اللمفاوية الشائعة باستخدام نظام التغذية AC-6. J. Vis. Exp. (2015)

يوضح هذا الفيديو فحصا في المختبر لتوليد الخلايا المتغصنة البلازمية (pDCs) من الخلايا السلفية اللمفاوية الشائعة (CLPs). عند الزراعة المشتركة ل CLPs المنقاة مع خلايا التغذية المشععة γ في وجود ترابط التيروزين كيناز -3 الشبيه ب FMS (FL) ، تتمايز CLPs إلى pDCs غير ملتصقة ، يتم تأكيد وجودها باستخدام قياس التدفق الخلوي.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. تحضير خلايا التغذية AC-6

< p class = "jove_content" >ملاحظة: يجب الحفاظ على خط الخلايا اللحمية AC-6.21 (AC-6 باختصار) (مقدم من I. Weissman ، جامعة ستانفورد) في RPMI مكمل بنسبة 15٪ من مصل الأبقار الجنينية المعطل بالحرارة (FBS). لتكون بمثابة خلايا مغذية ، يتم تشعيع خلايا AC-6 γ ب 3,000 راد (30Gy) قبل يوم واحد من الزراعة المشتركة لمنع انتشارها. لاحظ أن خلايا AC-6 تميل إلى فقدان قدرتها على دعم التمايز إذا تركت مكتظة أثناء الصيانة ، أو إذا كان عدد مرورها أكثر من 20.

  1. اغ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments مضاد للماوس Ly6g / Ly6c (PE) ، استنساخ RB6-8C5 بيوليجند 108408 علامة النسب مضاد للماوس NK1.1 (PE) ، استنساخ PK136 بيوليجند 108708 علامة النسب مضاد للفأر CD11b (PE) ، cloneM1 / 70 بيوليجند 101208 علامة النسب مضاد للفأر CD19 (PE) ، استنساخ eBio1D3 بيوليجند 115508 علامة النسب مضاد للماوس B220 (PE) ، استنساخ RA3-6B2 بيوليجند 103208 علامة الخط / FACS مضاد للفأر CD3 (PE) ، استنساخ 17A2 بيوليجند 100308 علامة النسب مضاد للفأر CD8a (PE) ، استنساخ 53-6.7 بيوليجند 100707 علامة النسب مضاد للفأر MHC-II (PE) ، استنساخ NIMR-4 بيوليجند 107608 علامة النسب مضاد للماوس Ter119 (PE) ، استنساخ TER-119 بيوليجند 116208 علامة النسب مضاد للفأر Thy1.1 (PE) ، استنساخ HIS51 العلوم البيولوجية الإلكترونية 12-0900-83 علامة النسب مضاد للماوس M-CSFR (APC)، استنساخ AFS98 بيوليجند هاتف: 135510 FACS مجموعة C المضادة للماوس (PerCP / Cy5.5) ، استنساخ 2B8 بيوليجند 105824 FACS مضاد للماوس Sca-1 (FITC) ، استنساخ D7 بيوليجند 108106 FACS مضاد للفأر IL-7Ra (PE / Cy7) ، استنساخ A7R34 بيوليجند 135014 FACS CD11c مضاد للماوس (PerCP/Cy5.5)، استنساخ N418 بيوليجند 117328 FACS مضاد للفأر CD11b (FITC) ، استنساخ M1 / 70 بيوليجند 101206 FACS فاكساريا III BD Biosciences فارز الخلايا أنبوب الفرز FACS BD Biosciences 352054 فلولجو فلونجو ذ.م.م برامج تحليل التدفق

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Plasmacytoid Dendritic CellsCommon Lymphoid ProgenitorsFlow CytometryFLT3 LigandFeeder Cell SystemCell DifferentiationBone Marrow IsolationAntibody StainingCell SortingIn Vitro Culture

Related Articles