الجهاز المناعي ومكوناته

في هذا الفيديو ، نوضح عزل الخلايا الوحيدة عن دم الإنسان الكامل عن طريق الفصل السلبي المناعي المغناطيسي. يمكن استخدام الخلايا الوحيدة المعزولة لمزيد من التحليل النهائي.

في هذا الفيديو ، نوضح عزل خلايا Kupffer أو ضامة الكبد عن كبد الفأر. يتم حشو الكبد بمحلول هضم متبوعا بفصل تدرج الكثافة. يمكن استخدام خلايا Kupffer الملتصقة المعزولة لمزيد من التحليل.

يوضح هذا الفيديو بروتوكولا خاليا من الإنزيم لعزل البلاعم من عقدة الجذر الظهري للفأر (DRG) باستخدام تقنية التفكك الميكانيكي. عند تجانس أنسجة DRG التي تم جمعها حديثا ، يتم استخدام الأجسام المضادة ضد مستقبلات سطح الخلية على البلاعم لتسمية الخلايا بالفلورسنت ، متبوعا بإجراء قياس التدفق الخلوي لتأكيد وجود البلاعم في العينة.

في هذا الفيديو ، نوضح عزل الخلايا الليمفاوية عن رقعة Peyer التي تم حصادها من الفأر. يمكن استخدام الخلايا الليمفاوية المعزولة لمزيد من التحليل.

في هذا الفيديو ، نوضح عزل خلايا الدم المحيطية أحادية النواة ، PBMCs ، التي تحتوي على خلايا وحيدة وخلايا ليمفاوية من طبقة مصفرة بشرية عن طريق الطرد المركزي المتدرج الكثافة. يمكن استخدام PBMCs المعزولة لمزيد من التحليل.

في هذا الفيديو ، نوضح عزل الخلايا البائية عن الدم المحيطي البشري باستخدام الأجسام المضادة البيوتينيل الخاصة بالخلايا غير البائية والميكروبيدات المغناطيسية المترافقة بالستربتافيدين.

في هذا الفيديو ، نوضح عزل واستزراع الخلايا اللحمية لنخاع العظم من العظام الطويلة للفئران. يمكن استخدام BMSCs الملتصقة المعزولة لمزيد من التحليل.

يوضح هذا الفيديو عزل الخلايا التائية عن خلايا الدم المحيطية أحادية النواة (PBMCs) باستخدام تقنية فرز الخلايا المنشطة بالطفو الوظيفية (BACS). تتضمن تقنية العزل الاختيار الإيجابي لخلايا CD3 + T عن طريق تسمية الخلايا بالأجسام المضادة المضادة ل CD3 البيوتينيل وفصل الخلايا المرتبطة بالأجسام المضادة باستخدام الفقاعات الدقيقة المرتبطة بالستربتافيدين.

في هذا الفيديو ، نصف بروتوكولا لتنشيط الخلايا التائية الأولية البشرية. يؤدي حضانة الخلايا التائية الساذجة بخرز مغناطيسي مغلف بالأجسام المضادة المضادة ل CD3 و CD28 ، متبوعا بعلاج الإنترلوكين 2 أو الإنترلوكين -15 ، إلى تنشيط الخلايا التائية الساذجة وتمايزها وتكاثرها في الخلايا التائية المستجيبة أو الذاكرة.

في هذا الفيديو ، نوضح عزل الكريات البيض الكبدية الهامشية من كبد الفأر عن طريق التروية القسرية.

يوضح هذا الفيديو عزل الخلايا الليمفاوية ، بما في ذلك الخلايا القاتلة الطبيعية أو الخلايا القاتلة الطبيعية ، من أنسجة الكبد البشري للتمدد الانتقائي. الهضم الأنزيمي والميكانيكي ، متبوعا بفصل تدرج الكثافة ، يعزز عزل الخلايا الليمفاوية ، بما في ذلك الخلايا القاتلة الطبيعية. يمكن استخدام الخلايا الليمفاوية المجمعة أيضا للتوسع الانتقائي لخلايا NK.

يوضح هذا الفيديو تقنية لتوسيع الخلايا القاتلة الطبيعية (NK) مباشرة من خلايا الدم المحيطية أحادية النواة (PBMCs) باستخدام خط الخلايا المغذية. يتم استزراع PBMCs بشكل مشترك مع الخلايا المغذية للأرومات الليمفاوية المعدلة وراثيا التي تعبر عن إنترلوكين -21 المرتبط بالغشاء (mIL-21) ، ويتم استكمال الثقافة بالسيتوكينات إنترلوكين -2 (IL-2) وإنترلوكين -15 (IL-15). معا ، يؤدي هذا المزيج من الروابط إلى التوسع المطول لخلايا NK ذات النقاء العالي.

يوضح هذا الفيديو إجراء عزل خلايا سيرتولي عن الأنابيب المنوية للفأر ، وهي أحد مكونات الخصيتين. يعزز الهضم الأنزيمي والغسول المتكرر إطلاق خلايا سيرتولي في المحلول ، والتي يمكن زراعتها بشكل أكبر للتكاثر والنمو.

يوضح هذا الفيديو بروتوكولا للعزل القائم على الملصقات المغناطيسية لمجموعة منخفضة التركيز من الخلايا التائية CD4 + Vδ1 + γδ من خلايا الدم المحيطية البشرية أحادية النواة (PBMCs). باستخدام مزيج من الأجسام المضادة المضادة ل Vδ1 المترافقة ب FITC ، والميكروبيدات المغناطيسية المضادة ل FITC ، والخرز المغناطيسي الفائق المغلفة بالأجسام المضادة ل CD4 ، يمكن تنقية الخلايا التائية CD4 + Vδ1 + بنجاح من مجموعة PBMC.

في هذا الفيديو ، نوضح عزل العدلات عالية الكثافة السامة للخلايا والعدلات منخفضة الكثافة من دم الفأر الحامل للورم عن طريق الطرد المركزي المتقطع للتدرج للسكروز.

يوضح هذا الفيديو إجراء عزل شبكة الخلايا المناعية اللثوية عن نموذج الفأر. يطلق الهضم الأنزيمي أنسجة اللثة من الأسنان والعظام المرفقة ، والتي يتم هضمها ميكانيكيا ، وإطلاق الخلايا المناعية من اللثة. الخلايا المعزولة جاهزة للتجارب المناعية.

< p class = "jove_content" >يوضح هذا الفيديو طريقة غسل بريتوني لعزل الخلايا البدينة الناضجة من نوع النسيج الضام من التجويف البريتوني للفئران البالغة. عند عزل خليط من الخلايا المناعية الأولية من التجويف البريتوني ، يتم إجراء التكاثر الانتقائي للخلايا البدينة في ظل ظروف الثقافة المناسبة.

في هذا الفيديو ، نصف بروتوكولا لعزل خلايا CD11b ، بما في ذلك الخلايا الدبقية الصغيرة ، من أدمغة جرو الفئران باستخدام فرز الخلايا المنشطة مغناطيسيا. يتم تجانس أنسجة المخ للحصول على معلقات أحادية الخلية ، والتي يتم تحضينها بميكروبيدات مغلفة بالأجسام المضادة المضادة ل CD11b ، متبوعة بفصل قائم على العمود المغناطيسي لتنقية خلايا CD11b +.

يوضح هذا الفيديو إجراء العزل الجراحي للعقدة الليمفاوية التي تصريف إربي من نموذج الفأر. يوفر شق منطقة البطن الوصول إلى العقدة الليمفاوية الأربية ، والتي يتم حصادها جراحيا. يمكن استخدام العقدة الليمفاوية الأربية الشفافة المحصودة في الدراسات المناعية.

يوضح هذا الفيديو تقنية تشريح لحصاد الغدد الليمفاوية المأبضية من الأرجل الخلفية للفأر. تلعب الغدد الليمفاوية دورا مهما في سد الفجوة بين المناعة الفطرية والتكيفية، ويمكن أن يساعد حصاد الغدد الليمفاوية السليمة — مع بنية الأنسجة المحفوظة والقدرة الخلوية على البقاء — في دراسة الاستجابات المناعية المحلية والجهازية.

يوضح هذا الفيديو تحضير الخلايا الوحيدة الأولية إلى الضامة. يمكن عزل الخلايا الوحيدة البشرية الأولية وتمييزها إلى نمط ظاهري مؤيد للالتهابات يشبه M1 باستخدام عامل تحفيز مستعمرة الخلايا الحبيبية والبلاعم (GM-CSF) أو إلى نمط ظاهري مضاد للالتهابات يشبه M2 باستخدام عامل تحفيز مستعمرة البلاعم (M-CSF).

< ص الفئة = "jove_content">يصف هذا الفيديو طريقة في المختبر لتوليد البلاعم من الخلايا الجذعية متعددة القدرات المستحثة البشرية (iPSCs). يحدث توليد البلاعم من iPSCs على ثلاث مراحل: (أنا) تجميع iPSCs في تعليق لتشكيل أجسام جنينية ثلاثية الأبعاد (EBs) التي تتمايز إلى خلايا الأديم المتوسط, (ثانيا) تشكيل خلايا سلائف البلاعم من EBs المتمايزة, و (ثالثا) تمايز الخلايا السليفة الضامة إلى ناضجة, الضامة الوظيفية.

في هذا الفيديو ، نوضح إجراء للحث على تمايز واستقطاب الخلايا الوحيدة المشتقة من الدم المحيطي إلى ضامة M1 أو M2. ينتج عن الحضانة بعامل تحفيز مستعمرة الخلايا الحبيبية والبلاعم ، وعديدات السكاريد الدهنية ، والإنترفيرون جاما ضامة M1 مؤيدة للالتهابات ، بينما يؤدي الحضانة بعامل تحفيز مستعمرة البلاعم والإنترلوكين -4 إلى إنتاج البلاعم M2 المضاد للالتهابات.

يوضح هذا الفيديو فحصا في المختبر لتوليد الخلايا المتغصنة البلازمية (pDCs) من الخلايا السلفية اللمفاوية الشائعة (CLPs). عند الزراعة المشتركة ل CLPs المنقاة مع خلايا التغذية المشععة γ في وجود ترابط التيروزين كيناز -3 الشبيه ب FMS (FL) ، تتمايز CLPs إلى pDCs غير ملتصقة ، يتم تأكيد وجودها باستخدام قياس التدفق الخلوي.

يوضح هذا الفيديو توليد الخلايا المتغصنة غير الناضجة والناضجة والتحمل ، أو DCs ، من الخلايا الوحيدة البشرية. يؤدي حضانة الخلايا الوحيدة مع عوامل النمو والسيتوكينات إلى إنتاج DCs غير ناضجة. استجابة للجزيئات التنظيمية المناعية ، تتمايز DCs غير الناضجة إلى DCs تحلل وناضجة.

يوضح هذا الفيديو تمايز الخلايا اللحمية لنخاع العظم (BMSCs) إلى خلايا شحمية. في العملية المكونة من خطوتين ، في وجود عوامل نمو وهرمونات محددة ، تتمايز BMSCs غير المتمايزة أولا إلى خلايا الدهون. تؤدي الخطوة الثانية التي تنطوي على العلاج بالجلوكوز والأنسولين إلى تكوين الخلايا الشحمية الناضجة مع قطرات دهنية متعددة.

يوضح هذا الفيديو تقنية لتمايز الخلايا الضخمة وتكوين الصفائح الدموية. تتمايز الخلايا الجذعية السلفية المكونة للدم - المعزولة من دم الحبل السري البشري - إلى خلايا ضخمة ناضجة في وجود الثرومبوبويتين. تنتج الخلايا الضخمة الناضجة امتدادات سيتوبلازمية تسمى البروبلايت ، والتي تؤدي إلى ظهور الصفائح الدموية الفردية.

< p class = "jove_content">يوضح هذا الفيديو بروتوكولا لتوليد خلايا تائية وظيفية خاصة بالمستضد من الخلايا التائية غير الناضجة المشتقة من iPSC باستخدام نظام ثقافة الغدة الصعترية ثلاثي الأبعاد. أدى الزراعة المشتركة للخلايا التائية غير الناضجة المشتقة من iPSC مع الفئران الداخلية المستنفدة من الخلايا الليمفاوية الفصوص الصعترية الجنينية إلى النضج الناجح للخلايا التائية لتشكيل CD8αβ + معقد التوافق النسيجي الكبير من الفئة الأولى + iPSC المهاجرين الصعتريين المشتقة من (iTEs).

في هذا الفيديو ، نصف بروتوكولا لتنقية الصفائح الدموية من دم الفئران الكامل وتنشيطها اللاحق باستخدام الثرومبين ناهض الصفائح الدموية. عند تحليلها باستخدام قياس التدفق الخلوي ، يتم تمييز الصفائح الدموية المنقاة بناء على التعبير عن علامة سطح الخلية CD41 ، في حين أن الصفائح الدموية المنشطة المنقاة تشارك في التعبير عن كل من علامات السطح CD41 و CD62P.

يوضح هذا الفيديو تقنية في المختبر لتوليد وعزل مصائد العدلات خارج الخلية (NETs). يتم عزل العدلات من الدم المحيطي ويتم تحفيزها باستخدام أسيتات فوربول ميريستات (PMA) لإنتاج NETs. أثناء الحضانة ، تخضع العدلات لعملية موت الخلايا (NETosis) لإطلاق NETs التي تتكون من الكروماتين غير المكثف الممزوج ببروتينات السيتوبلازم الحبيبية.

يوضح هذا الفيديو التمايز في المختبر لعامل تحفيز مستعمرة الخلايا الحبيبية والبلاعم أو الخلايا التائية المساعدة المنتجة للخلايا المعدلة وراثيا السائل الدماغي النخاعي (THGM). يتم تحفيز الخلايا التائية الساذجة المعزولة للتمايز إلىTH GM، وهو ما يتم تأكيده من خلال الكشف عن إنتاج GM-CSF العالي داخل الخلايا والتعبير المنخفض عن السيتوكينات الأخرى الخاصة بالخلايا التائية المساعدة.

يوضح هذا الفيديو مقايسة لونية لتحديد نشاط تحلل الخلايا البدينة. يقوم الإنزيم الذي تطلقه الخلايا البدينة بتحلل الركيزة وينتج منتجا ملونا. تم قياس نشاط تحلل الخلايا البدينة على أنه النسبة المئوية لإطلاق الإنزيمات خارج الخلية التي تم تطبيعها مع محتوى الإنزيم الكلي في الخلية.

في هذا الفيديو ، نصف بروتوكولا للفرز القائم على قياس التدفق الخلوي للخلايا البائية الساذجة وخلايا الذاكرة B وخلايا البلازما الصغيرة من خلايا الدم البدي المحيطية البشرية. يمكن تمييز المجموعات السكانية الفرعية المختلفة للخلايا البائية بناء على ارتباط الأجسام المضادة القائمة على الفلوروفور بمستقبلات CD19 و CD27 و CD38 المعبر عنها على أسطح الخلايا البائية ، متبوعا بفرز الخلايا.

يوضح هذا الفيديو استخدام مقايسة ELISpot لتقييم وظيفة الخلايا البائية التي تفرز الأجسام المضادة ، ASCs. تتفاعل الأجسام المضادة التي تفرزها ASCs مع شظايا الأجسام المضادة متعددة النسيلة المرتبطة بالغشاء ، والتي يتم اكتشافها بواسطة الأجسام المضادة IgG أو IgM المترافقة بالإنزيم. تشير البقعة الملونة المنتجة في كل بئر إلى وجود النمط الإسوي للجسم المضاد المحدد ، والذي يرتبط بالنشاط الإفرازي للخلايا البائية.

< p class = "jove_content" >في هذا الفيديو ، نصف بروتوكولا لعزل الخلايا المفردة عن الغدد الليمفاوية لتصريف البنكرياس الفئران (PDLNs) وتوصيف الخلايا التائية التنظيمية (Tregs) من مجموعة الخلية المفردة باستخدام قياس التدفق الخلوي. يتم تحديد Tregs بناء على التعبير الإيجابي لعلامات سطح الخلية CD4 و CD25 و Nrp1 ، جنبا إلى جنب مع عوامل النسخ النووي Foxp3 و Helios.

المصدر: Bello-Gamboa ، A. et al. ، تصوير المشبك المناعي البشري.J. Vis. Exp.(2019)
يوضح هذا الفيديو الدراسة المختبرية لتكوين المشبك المناعي بين الخلية العارضة للمستضد والخلايا الليمفاوية التائية المساعدة باستخدام المجهر الفلوري. تتفاعل مستقبلات الخلايا التائية للخلايا الليمفاوية التائية المساعدة مع مركب مستضد-معقد التوافق النسيجي الكبير الثاني في الخلايا العارضة للمستضد وتشكل نقاط الاشتباك المناعي ، تليها حركات الحويصلة الإفرازية نحو المشبك ، والتي يتم تصورها بواسطة المجهر الفلوري.

في هذا الفيديو ، نوضح تقنية قائمة على قياس التدفق الخلوي لتحديد نسبة الخلايا التائية القاتلة التي يسببها السيتوكين ، خلايا CIK ، التي توسعت من ثقافة الخلايا أحادية النواة في الدم المحيطي.

يوضح هذا الفيديو طريقة تصوير لتصور إفراز إنترفيرون جاما (IFN-γ) في طحال الفأر. بعد العدوى البكتيرية وتحريض تراكم IFN-γ داخل الخلايا التائية والخلايا القاتلة الطبيعية ، يتم حصاد الطحال من الفأر. عند الحصول على أقسام الأنسجة ، يتم إجراء التلوين المناعي لتصور IFN-γ داخل الخلايا.

في هذا الفيديو ، نصف بروتوكولا للتلوين المناعي والتصور القائم على الفحص المجهري متحد البؤر لمصائد البلاعم خارج الخلية (METs) في أنسجة رئة الفئران. تتميز البلاعم المقيمة في الأنسجة بالتعبير عن علامة البروتين السكري السطحية F4 / 80 الخاصة بالبلاعم ، بينما يتم تصور METs من خلال تسمية مصفوفة علامات MET بالبروتيناز المعدني 9 ، والهيستون H3 الرقيق ، والكروماتين خارج الخلية.

يوضح هذا الفيديو تقنية تجانس فعالة لتوليد مستحلب مساعد مستضد للحث على التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي (EAE) في نموذج الفئران. يحتوي المستحلب على مستضد ذاتي - بروتين سكري قليل التغصن المايلين (MOG) - في الطور المائي ، محاطا بمرحلة زيت مستمرة تشتمل على بكتيريا مسببة للأمراض معطلة يضمن المستحلب إطلاقا مستداما للمستضدات لاستجابة مناعية طويلة.

يوضح هذا الفيديو تصور الخلايا الليمفاوية داخل الظهارة (IELs) في الفئران المعدلة وراثيا باستخدام الفحص المجهري متحد البؤر. يتضمن الإجراء الجراحي إنشاء خط ثقب وعمل شق طولي لفضح الغشاء المخاطي والأمعاء والزغابات. تعبر الفئران المعدلة وراثيا عن بروتينات المراسل حصريا في γδ IELs ، مما يسمح بتتبعها. يلتقط التصوير داخل الحيوية الحركة الديناميكية ل γδ IELs ذات التألق الأخضر على طول الغشاء القاعدي للخلية الظهارية المعوية.

يوضح هذا الفيديو توليد وعزل الجسيمات الدقيقة المشتقة من الخلايا الليمفاوية التائية ، LMPs ، من الخلايا الليمفاوية التائية بعد العلاج بالأكتينومايسين-D.

يصف هذا الفيديو بروتوكولا لعزل خلايا CD8 + T النادرة الخاصة بالمستضد باستخدام الخلايا العارضة للمستضد الاصطناعي القائمة على الجسيمات النانوية المغناطيسية (aAPCs) التي تعمل مع معقد التوافق النسيجي الكبير المحمل بالمستضد والأجسام المضادة ل CD28. يؤدي تفاعل aAPCs مع خلايا CD8 + T التي تعبر على وجه التحديد عن مستقبلات الخلايا التائية التي تستهدف الببتيد المستضد ، متبوعا بتوسعها في المختبر ، إلى تخصيب وتوسيع مجموعة الخلايا التائية CD8 +.

يوضح هذا الفيديو فصل العدلات عن إفرازات القصبة الهوائية باستخدام جهاز ميكروفلويديك مع قنوات حلزونية. يحقق الجهاز فصلا فعالا بناء على حجم الخلية من خلال استخدام سماكات متفاوتة وقنوات شبه منحرفة. ينتج عن التفاعل بين القوى تراكم العدلات الكبيرة بالقرب من الجدار الداخلي بينما تظل كريات الدم الحمراء ومجاميع الميوسين بالقرب من الجدار الخارجي ، مما يضمن فصلا فعالا للعدلات.

في هذا الفيديو ، نوضح وضع العلامات الإشعاعية داخل الخلايا للخلايا التائية المساعدة باستخدام الأجسام المضادة أحادية النسيلة المترافقة بالنظائر المشعة لتصوير التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني غير الغازي.