توليد الخلايا المتغصنة غير الناضجة والناضجة والتحمل من الخلايا الوحيدة

الملخص

المصدر: Sim، W.J. et al.، جيل من الخلايا المتغصنة غير الناضجة والناضجة والتوليروجينيك ذات الأنماط الظاهرية الأيضية المختلفة.J. Vis. Exp.(2016).

يوضح هذا الفيديو توليد الخلايا المتغصنة غير الناضجة والناضجة والتحمل ، أو DCs ، من الخلايا الوحيدة البشرية. يؤدي حضانة الخلايا الوحيدة مع عوامل النمو والسيتوكينات إلى إنتاج DCs غير ناضجة. استجابة للجزيئات التنظيمية المناعية ، تتمايز DCs غير الناضجة إلى DCs تحلل وناضجة.

البروتوكول

تم تنفيذ جميع الإجراءات التي تشمل مشاركين بشريين وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية والوطنية والدولية لرفاهية الإنسان وتمت مراجعتها من قبل مجلس المراجعة المؤسسية المحلي.

< p class = "jove_title" >1. عزل خلايا الدم المحيطية أحادية النواة (PBMCs)

1. تحضير الكاشف
   1. تحضير PBS / EDTA: محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) ومكملات بحمض الإيثيلين ديامين تترا أسيتيك 2 ملي مولار (EDTA). قم بتعقيم هذا المحلول عن طريق الترشيح من خلال مرشح 0.2 ميكرومتر. ملاحظة لتخزين PBS / EDTA عند 4 درجات مئوية وتسخينها إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام.
   2. تحضير محلول تلطيخ المخزن المؤقت: مكمل محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) مع مصل بق....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات فيكول جنرال إلكتريك للرعاية الصحية 17-1440-03 عزل PBMC حقنة بيكتون ، ديكنسون 302832 عزل PBMC أنبوب الطرد المركزي 1.5 مل أكسايجن MCT-150-C عزل PBMC أنبوب الصقر 15 مل صقر 352096 عزل PBMC 50 مل أنبوب الصقر صقر 352070 عزل PBMC الطرد المركزي إيبندورف 5810 ص عزل PBMC مرشح 0.2 ميكرومتر Sartorius stedim التكنولوجيا الحيوية 17597 عزل PBMC طقم MACs ميلتيني بيوتيك 130-042-201 تخصيب الخلايا الأحادية فاصل MiniMACS ميلتيني بيوتيك 130-042-102 تخصيب الخلايا الأحادية مياه من الدرجة المزروعة الخلوية Invitrogen ، تقنيات الحياة زراعة الخلايا RPMI جيبكو ، لايف تكنولوجيز 11875-093 زراعة الخلايا FBS هيكلون SH30070103 زراعة الخلايا البنسلين - ستربتومايسين جيبكو ، لايف تكنولوجيز 15140 زراعة الخلايا محلول ملحي مخزن بالفوسفات جيبكو ، لايف تكنولوجيز 10010-031 زراعة الخلايا NEAA جيبكو ، لايف تكنولوجيز 11140-040 زراعة الخلايا EDTA جيبكو ، لايف تكنولوجيز 15575 [م] زراعة الخلايا هيبس جيبكو ، لايف تكنولوجيز هاتف: 15630-080 زراعة الخلايا بيروفات الصوديوم جيبكو ، لايف تكنولوجيز هاتف: 11360-070 زراعة الخلايا GM-CSF ميلتيني بيوتيك 130-093-868 زراعة الخلايا IL-4 ميلتيني بيوتيك 130-093-924 زراعة الخلايا فيتامين د 3 سيغما د1530 زراعة الخلايا ديكساميثازون سيغما د2915 زراعة الخلايا لبس سيغما L2755 زراعة الخلايا تريبان بلو جيبكو ، لايف تكنولوجيز 15250-061 زراعة الخلايا