Method Article

عزل الخلايا التائية القائم على التعويم باستخدام فرز الخلايا المنشط بالطفو

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Snow، T.، et al. عزل الخلايا التائية القائمة على التعويم وتنشيطها وتمددها من عينات الخلايا أحادية النواة أحادية الدم المحيطية البشرية باستخدام الفقاعات الدقيقة. J. Vis. Exp. (2022)

يوضح هذا الفيديو عزل الخلايا التائية عن خلايا الدم المحيطية أحادية النواة (PBMCs) باستخدام تقنية فرز الخلايا المنشطة بالطفو الوظيفية (BACS). تتضمن تقنية العزل الاختيار الإيجابي لخلايا CD3 + T عن طريق تسمية الخلايا بالأجسام المضادة المضادة ل CD3 البيوتينيل وفصل الخلايا المرتبطة بالأجسام المضادة باستخدام الفقاعات الدقيقة المرتبطة بالستربتافيدين.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_title" >1. عزل الخلايا التائية بالفقاعات الدقيقة باستخدام الاختيار الإيجابي

ملاحظة: يوضح هذا البروتوكول تفاصيل نهج الاختيار الإيجابي CD3+ على نطاق صغير باستخدام SAMBs.

  1. احتضان 3 × 108 PBMCs التي تم الحصول عليها تجاريا في 2.5 مل من المخزن المؤقت للفصل مع الجسم المضاد المضاد للبيوتينيل CD3 (OKT3) بتركيز 25 نانوغرام من الجسم المضاد لكل 1 مليون خلية (25 نانوغرام / م). تخلط برفق عن طريق سحب العينات لأعلى ولأسفل ، وتحتضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق.
  2. أضف فقاعات الستربتافيدين الدقيقة (SAMBs) بنسبة 0.5 (كمية SAMB): 1 (كمية الخلية) وفقا لتركيز SAMB المبلغ عنه من قبل الشرك....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments البيوتين المضاد للإنسان CD3 (OKT3) الجسم المضاد بيوليجند هاتف: 317320 ليوكوباك بيوآي تي HUMANLMX100-0001129 PBMCs البشرية العادية بيوآي تي هومانهال ب - 0002562 مجموعة Streptavidin Microbubble Kit (تتضمن المخزن المؤقت لفصل Akadeum) أكاديوم 11110-000

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Buoyancy Activated Cell SortingT Cell IsolationMicrobubble SeparationCD3 Antibody LabelingStreptavidin MicrobubblesPeripheral Blood Mononuclear CellsPositive Cell SelectionCentrifugation SeparationCell Surface MarkersImmune Cell Isolation

Related Articles