عزل الكريات البيض الكبدية الهامشية من كبد الفأر

الملخص

المصدر: Sorski, L., et al. الحصاد الانتقائي للكريات البيض الكبدية الهامشية. J. Vis. Exp. (2016)

في هذا الفيديو ، نوضح عزل الكريات البيض الكبدية الهامشية من كبد الفأر عن طريق التروية القسرية.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. بروتوكول الماوس

1. نضح الكبد وجمع MH-Leukocytes
   1. قتل بجرعة زائدة من 8٪ إيزوفلوران. كإجراء احترازي ، ضع أنبوبا سعة 15 مل يحتوي على وسادة مبللة بالأيزوفلوران حول رأس الفأر حتى فتح تجويف الصدر.
   2. ثبت أطراف الفأر على السرير.
   3. افتح تجاويف البريتونية والصدر لكشف الكبد والمركب القلبي الرئوي فور توقف التنفس ، مع الحفاظ على الجانب السفلي من الحجاب الحاجز سليما (لإنشاء تجمع تجويف الصدر لتصريفه). تجنب النزيف خلال هذه العملية.
      1. على وجه التحديد ، ابدأ الشق عند نقطة خط الوسط السفلية للبطن ، دون الإضرار بالأعضاء الداخلية ، وتقدم إلى كلا الجانبين قطريا باتجاه الأضلاع ، وقطعها إلى مستويات تجويف الصدر العلوية.
   4. اسحب الأمعاء وضعها خارج على يمين المجرب لكشف الوريد البابي.
   5. أدخل إبرة 30 جم ، متصلة بمضخة تمعجية في الوريد البابي المنقاري إلى الوريد الطحالي.
   6. قم بقص الوريد الأجوف السفلي فوق الحجاب الحاجز للسماح بتصريف وجمع النفوت من تجويف الصدر.
   7. قم بتشغيل المضخة التمعجية بسرعة 3 مل / دقيقة تقريبا واجمع برفق أول 3 مل من الريشة الملوثة بالدم من بركة تجويف الصدر.
   8. تجاهل هذا التعزيد. كرر هذا الغسيل مرة أخرى إذا لزم الأمر ، باستخدام محلول ملحي ، وعندها فقط ابدأ في جمع نفوس الكبد.
   9. أعد بدء التروية بسرعة تصل إلى 4 مل / دقيقة ، وجمع 10 مل من الريشات من تجويف الصدر باستخدام فراشة متصلة بحقنة.
   10. إنهاء التروية عندما يتحول لون الكبد إلى اللون البني الفاتح.

< p class = "jove_title" >2. استخراج الكريات البيض

1. جهاز الطرد المركزي للتعيد لمدة 10 دقائق عند 400 × جم.
2. شفط المادة الطافية.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات مضخة التمعجية الأوتوكلد إبرة الفراشة يا إلهي 26 جرام إبرة الفراشة يا إلهي 21 جرام * 3/4 " حقنة حل الموافقة المسبقة عن علم 1 مل حقنة حل الموافقة المسبقة عن علم 2.5 مل حقنة حل الموافقة المسبقة عن علم 5 مل حقنة حل الموافقة المسبقة عن علم 10 مل حقنة حل الموافقة المسبقة عن علم 25 مل ملقط ذو حواف حادة مقص Hemostat ملقط الأنسجة