وضع العلامات على الخلايا الليمفاوية T المساعدة الفئران باستخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ذات العلامات الإشعاعية

الملخص

المصدر: Hoffmann، S.H.L.، وآخرون ، وضع العلامات على الخلايا الليمفاوية الفئران بواسطة ⁶⁴استهداف مستقبلات الأجسام المضادة للنحاس للاتجار بالخلايا في الجسم الحي بواسطة PET / CT. J. Vis. Exp. (2017)

في هذا الفيديو ، نوضح وضع العلامات الإشعاعية داخل الخلايا للخلايا التائية المساعدة باستخدام الأجسام المضادة أحادية النسيلة المترافقة بالنظائر المشعة لتصوير التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني غير الغازي.

البروتوكول

فئة

1. cOVA-TH1 خلية الملصقات الإشعاعية

ملاحظة: سيتم تطبيق ⁶⁴Cu-DOTA-KJ1-26-mAb على خلايا cOVA-TH1 المستنبتة لتمكين وضع العلامات المشعة داخل الخلايا.

1. بالنسبة للوسم الإشعاعي لخلية cOVA-TH1 ، ارسم 37 ميجابايت من ⁶⁴Cu-DOTA-KJ1-26-mAb الملصق بالإشعاع في حقنة بدون حجم ميت باستخدام معاير الجرعة. أضف 1 مل من المحلول الملحي لتلقي محلول 37 ميجابايت / مل.
2. قم بتعليق خلايا cOVA-TH1 في الوسط عند 2 × 10⁶ خلايا / مل وأضف 0.5 مل من تعليق الخلية إلى كل بئر في صفيحة 48 بئرا.
3. أضف 20 ميكرولتر من محلول 37 ميجابايت / مل ⁶⁴Cu-DOTA-KJ1-26-mAb المحضر حديثا إلى كل بئر من اللوحة المكونة من 48 بئرا. النسبة النهائية لوضع العلامات هي 0.7 ميجابايت في كل 10⁶ خلايا بحجم 520 ميكرولتر. احتضان عند 37 درجة مئوية و 7.5٪ ثاني أكسيد_{الكربون 2} لمدة 30 دقيقة.
4. بعد الحضانة ، أعد تعليق الخلايا في كل بئر بعناية وانقل تعليق الخلية من اللوحة المكونة من 48 بئرا إلى أنبوب غطاء لولبي سعة 50 مل. لتقليل فقدان الخلايا ، اشطف كل بئر بوسط دافئ مسبقا.
5. جهاز الطرد المركزي لتعليق الخلية cOVA-TH1 عند 400 × جم لمدة 5 دقائق ، وتخلص من المادة الطافية ، وأعد تعليق الخلايا في 10 مل من PBS الدافئ مسبقا. قم بإزالة حصة من معلق الخلية لعد الخلايا. كرر خطوة الغسيل.
6. عد خلايا cOVA-TH1 القابلة للحياة في تخفيف مناسب مع تلطيخ التريبان الأزرق.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات ⁶⁴وحدة عمل النحاس WKL حسب الطلب ⁶⁴إنتاج النحاس معاير الجرعة كابينتك CRC-25R PETtrace سيكلوترون جنرال إلكتريك للأنظمة الطبية DOTA-NHS الحلقات الكبيرة ب -280 الجسم المضاد ل cOVA-TCR (KJ1-26) معزولة عن زراعة خلايا الورم الهجين اقتران DOTA نا₂HPO₄ سيجما ألدريتش 71633 اقتران DOTA H⁺ شيلكس 100 سيجما ألدريتش [ك7901] اقتران DOTA وحدة فلتر Amicon Ultra-15 ميرك ميليبور UFC910008 اقتران DOTA مياه روتيبوران فائقة النقاء كارل روث HN68.3 اقتران DOTA أسيتات الأمونيوم سيجما ألدريتش 32301 اقتران DOTA برنامج تلفزيوني جامعة توبينغن اقتران DOTA عمود Micro-Bio-Spin P-6 مختبرات بيو راد 7326221 اقتران DOTA سترات الصوديوم سيجما ألدريتش 71497 اقتران DOTA Cyclone Plus PhosphorImager بيركين إلمر L2250116 اقتران DOTA DMEM ميرك ميليبور 102568 مكون لوسط الخلية التائية FCS ميرك ميليبور S0115 / 1004B مكون لوسط الخلية التائية بيروفات الصوديوم ميرك ميليبور L0473 مكون لوسط الخلية التائية الأحماض الأمينية MEM ميرك ميليبور ك 0293 مكون لوسط الخلية التائية هيبس ميرك ميليبور ل 1613 مكون لوسط الخلية التائية البنسلين / الستربتومايسين ميرك ميليبور أ 2212 مكون لوسط الخلية التائية 0.05 ملي مولار 2-β-ميركابتو إيثانول سيجما ألدريتش م 3148 مكون لوسط الخلية التائية DO11.10 الفئران تربية داخلية ثقافة خلية TH1 DPBS جيبكو 14190144 ثقافة خلية TH1 مصفاة الخلية 40 ميكرومتر كورنينج هاتف: 352340 ثقافة خلية TH1 ACK Lysing Buffer لونزا 10-548 ه ثقافة خلية TH1 CD4 MicroBeads ، الماوس ميلتيني للتكنولوجيا الحيوية 130-097-145 ثقافة خلية TH1 فاصل QuadroMACS ميلتيني للتكنولوجيا الحيوية 130-090-976 ثقافة خلية TH1 عمود LS ميلتيني للتكنولوجيا الحيوية 130-042-401 ثقافة خلية TH1 الجسم المضاد ل CD4 (Gk1.5) معزولة عن زراعة خلايا الورم الهجين ثقافة خلية TH1 الجسم المضاد المضاد ل CD8 (5367.2) معزولة عن زراعة خلايا الورم الهجين ثقافة خلية TH1 الأجسام المضادة للفئران (MAR18.5) معزولة عن زراعة خلايا الورم الهجين ثقافة خلية TH1 تكملة الأرنب MA تبو بيو CL3221 ثقافة خلية TH1 الأجسام المضادة ل IL-4 (11B11) معزولة عن زراعة خلايا الورم الهجين ثقافة خلية TH1 cOVA 323-339-الببتيد مجموعات EMC-micro طلب مخصص ثقافة خلية TH1 CPG1668 قليل النوكليوتيدات Eurofins MWG أوبرون طلب مخصص ثقافة خلية TH1 IL-2 نوفارتيس هاتف: 65483-116-07 ثقافة خلية TH1 96 أطباق بئر غرينر 655180 ثقافة خلية TH1 أطباق 24 بئر غرينر 662160 [م] ثقافة خلية TH1 قارورة زراعة الخلية غرينر 660175 ثقافة خلية TH1 48 بئر لوحات غرينر 677 180 وضع العلامات على الخلايا جاماسيل 1000 أفضل ثيراترونيكس عبر الاستفسار جولماي RT225 جولماي عبر الاستفسار تريبان بلو ميرك ميليبور L6323 التقييم في المختبر