$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. تحضير الفئران و DSS
- احتفظ بالضربة القاضية (α-gustducin -/-) الفئران والتحكم من النوع البري المطابق للعمر والجنس ووزن الجسم (α-gustducin +/+) C57BL / 6 بشكل فردي في أقفاص نظيفة.
ملاحظه: تم تهجين الفئران بالضربة القاضية مع الفئران C57BL / 6 لأكثر من 20 جيلا ولديها خلفية وراثية C57BL / 6 بنسبة 100٪ تقريبا.
- قم بإذابة 30 جم من مسحوق كبريتات ديكستران الصوديوم (DSS) في 1 لتر من الماء المعقم. امزج حتى يصبح المحلول واضحا للتأكد من أن تركيز العمل النهائي هو 3٪ (وزن / حجم).
ملاحظه: يمكن تخزين محلول DSS في درجة حرارة الغرفة لمدة تصل إلى أسبوع واحد أو عند 4 درجات مئوية حتى الاستخدام.
< p class = "jove_title" >
2. تحريض وتقييم التهاب القولون DSS في الفئران
- قم بوزن وتسجيل وزن الجسم الأولي لكل فأر. ضع الفئران بشكل فردي في أقفاص بلاستيكية قياسية وقم بتسمية الأقفاص.
- استبدل مياه الشرب العادية بمحلول DSS بنسبة 3٪ لمدة 7 أيام يمكن لكلتا المجموعتين من الفئران الوصول إليها بشكل خاص.
- قم بقياس وزن جسم الماوس ، وتسجيل استهلاك محلول DSS ، وجمع وفحص براز كل فأر يوميا أثناء إدارة DSS. لاحظ شدة الإسهال ونزيف المستقيم وقم بتحويله إلى مؤشر المرض الناجم عن DSS.
- أثناء التجربة ، يتم حساب النسبة المئوية لفقدان الوزن مقارنة بالوزن الأولي ومؤشر المرض لتقييم أعراض التهاب القولون.
ملاحظه: يتم تسجيل مؤشر المرض من خلال الجمع بين ملاحظات الإسهال ونزيف المستقيم ويتم تعريفه على النحو التالي: 0 (براز طبيعي ، بدون دم) ، 1 (براز ناعم ، بدون دم) ، 2 (براز ناعم ، قليل من الدم) ، 3 (براز ناعم جدا ، نزيف متواضع) ، و 4 (براز مائي ، نزيف حاد). يتم تحليل مؤشر المرض يوميا لكل فأر.
- بحلول نهاية علاج DSS لمدة 7 أيام ، ضحي بالفئران عن طريق خلع عنق الرحم واستمر في التجارب المتبقية.
< p class = "jove_title" >
3. تحضير عينات الأنسجة
- ضع الفأر في وضع ضعيف ونظف جلد البطن بنسبة 70٪ من الإيثانول. قم بعمل شق خط الوسط بطول 3 سم في البطن بمقص صغير لكشف تجويف البطن.
- استخدم زوجا من الملقط لفصل الطحال بعناية عن الأنسجة الأخرى ، ثم قم بإزالة الطحال وقياس حجمه.
- تحديد القولون وارفعه بالملقط وفصله عن المساريق المحيط. اسحب القولون بالكامل حتى يظهر الأعور والمستقيم.
- اعزل القولون عن طريق تحويله إلى هامش القولون وعمق الحوض لتحرير القولون القريب والبعيد ، على التوالي. ثم قم بقياس وتسجيل طول القولون المعزول. احرص على عدم إتلاف أنسجة القولون أثناء إجراء التشريح.
- اغسل القولون ب 10 مل من محلول ملحي مخزن بالفوسفات المثلج (PBS) باستخدام حقنة سعة 10 مل مزودة بإبرة تزقيم لإزالة البراز والدم حتى يصبح الشطف صافيا تماما.
- لتحديد النسيجية ، قسم عينات الأنسجة بالتساوي إلى ثلاثة أجزاء: القريبة والوسطى والبعيدة. بعد ذلك ، قم بإصلاح الأنسجة بنسبة 4٪ بارافورمالدهيد (PFA) طوال الليل عند 4 درجات مئوية.