تقنية تزقيم داخل المعدة لعدوى هيليكوباكتر الخاضعة للرقابة في الفئران

الملخص

المصدر: D'Costa ، K. et al. ، نماذج الفئران لعدوى الملوية وأمراض المعدة.J. Vis. Exp.(2018)

يوضح هذا الفيديو إنشاء عدوى هيليكوباكتر بيلوري من خلال تقنية التزوين داخل المعدة في نموذج الفأر. يتم إعطاء المعلق البكتيري عن طريق قسطرة يتم إدخالها عبر الفم إلى المعدة. تستعمر البكتيريا الملقحة وتؤسس عدوى في المعدة ، والتي يمكن استخدامها لدراسة التفاعل بين المضيف والممرض.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< ص الفئة = "jove_title" >1. نمو وتحضير اللقاح البكتيري

1. قم بإذابة مخزونات الجلسرين من هيليكوباكتر بيلوري (H. pylori) أو H. felis من -80 درجة مئوية والزراعة الفرعية على صفائح أجار دم الحصان (HBA) التي تتألف من: قاعدة أجار الدم رقم 2 (انظر جدول المواد) ؛ "مكمل انتقائي للمضادات الحيوية في Skirrow" معدل (يتكون من فانكومايسين ، 10 ميكروغرام / مل ؛ بوليميكسين ب ، 25 نانوغرام / مل ؛ تريميثوبريم ، 5 ميكروغرام / مل ؛ الأمفوتريسين ب ، 2.5 ميكروغرام / مل) ؛ و 5-10٪ (V / v) دم الحصان. تنمو البكتيريا جيدا ف....

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1: صورة توضح تقنية التزقيم عن طريق الفم. يتم استخدام حقنة 1 مل يمكن التخلص منها وقسطرة مرنة لتوصيل ≥10⁵ CFU من اللقاح البكتيري إلى الفأر عبر الطريق داخل المعدة. تم تخدير الفأر باستخدام ميثوكسي فلوران وتم تثبيته بقبضة قوية على الرقبة ، مما يسمح بوصول القسطرة إلى المعدة عبر المريء.

....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات الكواشف البكتريولوجية قاعدة أجار الدم الأكسويد رقم 2 ثيرمو فيشر العلمي CM0271B يذوب في الماء منزوع الأنون قبل التعقيم دم الحصان الممتاز منزوع الضربات البيولوجيا الأخلاقية الأسترالية PDHB100 مرق تسريب القلب باكتو الدماغ BD Bioscience هاتف: 237500 يذوب في الماء منزوع الأنون قبل التعقيم حزم غاز CampyGen ثيرمو فيشر العلمي CN0035A / CN0025A الكواشف الأخرى ميثوكسي فلوران (بنتروكس) المنظمة الدولية للتطوير الطبي لا ينطبق المعدات والأواني البلاستيكية الجرار اللاهوائية الأكسويد ثيرمو فيشر العلمي HP0011 / HP0031 كوبان باستور ماصات خدمات Interpath 200 ع 01 جهاز الطرد المركزي Eppendorf 5810R اجمع الكريات البكتيرية عن طريق الطرد المركزي عند 2,200 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية 23 جرام إبرة انزلاق دقيقة BD Bioscience 301805 بارافيلم م بيميس ، VWR PM996 أنابيب البوليثين ذات التجويف الدقيق Portex سميثس الطبية 800/100/200 قسطرة التغذية البلاستيكية مختبرات إنستيك FTP20-30 1 مل توبركولين لوير زلة المحاقن التي يمكن التخلص منها BD Bioscience 302100 مدقة Eppendorf الدقيقة لأنابيب 1.2 - 2 مل سيجما ألدريتش Z317314 مدقات البولي بروبلين القابلة للتعقيم المستخدمة في تجانس المعدة حلقة بلاستيكية معقمة لاب سيرف LBSLP7202