توليد أسلاف عصبية من الخلايا الجذعية الجنينية في مزارع أحادية الطبقة خالية من المصل

الملخص

< p class = "jove_content" >المصدر: Wongpaiboonwattana ، W. ، et al. التمايز العصبي للخلايا الجذعية الجنينية للفأر في ثقافة أحادية الطبقة الخالية من المصل. J. Vis. Exp.(2015)

يوضح الفيديو بروتوكولا يستخدم وسائط خالية من المصل لتوليد أسلاف عصبية من الخلايا الجذعية الجنينية للفأر. التركيز المطلوب للخلايا الجذعية الجنينية ، المعلقة في وسائط خالية من المصل ، مطلي على أغطية مغلفة بالجيلاتين. عند الكثافة المثلى للخلايا ، تنتج الخلايا عوامل إشارات أوتوكرين ، والتي ، جنبا إلى جنب مع العوامل المحفزة للتمايز العصبي في الوسائط الخالية من المصل ، تؤدي إلى تمايز الخلايا الجذعية الجنينية إلى أسلاف عصبية.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. إعداد الوسائط

ملاحظة: يعتمد البروتوكول على استخدام مزيج من وسائطين منفصلتين: DMEM / F12 مكمل N2 المعدل و Neurobasal المكمل بمكمل B27 ، عادة بنسبة 1: 1.

1. تحضير مكمل N2 المعدل عن طريق خلط المكونات في أنبوب سعة 15 مل. لا تقم بدوامة أو تصفية هذا. امزج عن طريق قلب الأنبوب حتى يصبح المحلول صافيا.
   1. ابدأ بسحب 7.2 مل من DMEM/F12، ثم أضف 1 مل من الأنسولين 25 ملغم/مل (يتكون من 0.01 مليون) وتخلط جيدا عن طريق قلب الأنبوب. يستغرق الأمر بضع دقائق حتى يصبح الحل واضحا.
   2. أضف 1 مل من 100 مجم / مل apo-transferrin (مكون من الماء) ، و 33 ميكرولتر من 0.6 مجم / مل من البروجسترون (المكون من....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات مصل الأبقار الجنينية تقنيات الحياة 10270-106 DMEM / F12 تقنيات الحياة 11320-074 الوسط العصبي القاعدي تقنيات الحياة هاتف: 21103-049 كاشف تفكك الخلايا StemPro Accutase تقنيات الحياة أ11105-01 مكمل B-27 ، خال من المصل تقنيات الحياة 17504-044 إنسولين سيغما I6634 إعادة التكوين مع 0.01M حمض الهيدروكلوريك المعقم أبو ترانسفيرين سيغما تي 1147 إعادة التكوين بالماء المعقم البروجسترون سيغما ص 8783 إعادة التكوين بالإيثانول بوتريسين سيغما ص 5780 إعادة التكوين بالماء المعقم سيلينيت الصوديوم سيغما الطراز S5261 إعادة التكوين بالماء المعقم كسر الألبومين البقري V تقنيات الحياة هاتف: 15260-037 ل-جلوتامين تقنيات الحياة هاتف: 25030-081 تأكد من إذابته تماما قبل الاستخدام لأن الجلوتامين عادة ما يتم ترسيبه الجيلاتين سيغما جي 1890 6-صحن ثقافة الأنسجة الترمو: العلمية 140675 طبق زراعة الأنسجة 24 جيدا الترمو: العلمية 142475 طبق زراعة الأنسجة 96 جيدا الترمو: العلمية 167008 GMEM تقنيات الحياة 11710-035 مصل الأبقار الجنينية تقنيات الحياة 10270-106 محلول الأحماض الأمينية غير الأساسية MEM تقنيات الحياة 11140-050 بيروفات الصوديوم تقنيات الحياة هاتف: 11360-070 2-ميركابتو إيثانول سيغما M7522 قارورة زراعة الأنسجة 25 سم 2 الترمو: العلمية 156367