Method Article

تمييز الخلايا الجذعية العصبية البشرية إلى ثقافة ثلاثية الأبعاد باستخدام سقالة مسامية

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Stevanato، L. et al.، تمايز خط الخلايا الجذعية العصبية البشرية على الثقافات ثلاثية الأبعاد ، وتحليل الحمض النووي الريبي الصغير والجينات المستهدفة المفترضة. J. Vis. Exp. (2015)

يعرض هذا الفيديو تطور وتمايز الخلايا الجذعية العصبية البشرية داخل سقالة ثلاثية الأبعاد. يعزز طلاء اللامينين على السقالة ارتباط الخلية ، بينما يحفز الوسط العصبي الخالي من عامل النمو تمايز الخلايا إلى خلايا سلفية عصبية ، والتي توسع عملياتها داخل بنية مسامية في اتجاهات متعددة ، وتشكل ثقافة ثلاثية الأبعاد

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_title" >1. تمايز HNSC على ثقافة ثلاثية الأبعاد (3D)

< p class = "jove_content" >ملاحظة: عزل واستخلاص الخلايا الجذعية العصبية البشرية (hNSCs) من نسيج معتمد أخلاقيا موصوف في منشور سابق. يرجى اتباع الإرشادات الأخلاقية والمؤسسية أثناء اتباع هذا الإجراء.

  1. ثقافة 3D باستخدام لوحة 12 بئر
    1. استخدم تقنية معقمة طوال العملية. في خزانة السلامة البيولوجية ، أعد ترطيب السقالات بإضافة 2 مل / بئر من 70٪ من الإيثانول المحضر باستخدام مياه الري (WFIr). تجنب لمس السقالات عن طريق توزيع 70٪ من الإيثانول أسفل جدار كل بئر.
    2. استنشق الإيثانول بنسبة 70٪ بعناية واغسل السقالات على الفور ب 2 مل / بئر Dulbecco's Modified Eagle Medium F....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments DMEM: F12 إنفيتروجين هاتف: 21331-020 لإعداد متوسط RMM محلول الألبومين البشري باكستر للرعاية الصحية المحدودة 1501052 لوسط RMM المستخدم بتركيز نهائي قدره 0.03٪ ترانسفرين ، مؤتلف بشري سيغما تي 8158 بالنسبة لوسط RMM المستخدم بتركيز نهائي قدره 5 ميكروغرام / مل بوتريسين ثنائي حمض الهيدروكلوريد سيغما ص 5780 بالنسبة لوسط RMM المستخدم بتركيز نهائي قدره 16.2 ميكروغرام/مل الأنسولين ، مؤتلف بشري سيغما I9278 بالنسبة لوسط RMM المستخدم بتركيز نهائي قدره 5 ميكروغرام / مل البروجسترون سيغما ص 6149 لوسط RMM المستخدم بتركيز نهائي قدره 60 نانوغرام / مل ل-جلوتامين إنفيتروجين 25030-24 لوسط RMM المستخدم بتركيز نهائي قدره 2 ملي مولار سيلينيت الصوديوم سيغما إس 9133 لوسط RMM المستخدم بتركيز نهائي قدره 40 نانوغرام / مل bFGF بيبروتك AF-100-15 يضاف إلى وسط RMM ، يستخدم بتركيز نهائي قدره 10 نانوغرام / مل EGF بيبروتك أف 100-188 يضاف إلى وسط RMM ، يستخدم بتركيز نهائي قدره 20 نانوغرام / مل 4-OHT سيغما H7904 يضاف إلى وسط RMM ، يستخدم بتركيز نهائي يبلغ 100 نانومتر لامينين AMS Biotech 3400-010-10 مياه الري باكستر للرعاية الصحية UKF7114 طبق Alvetex 12 جيدا Reinnervate المحدودة أفب002 ايثانول ميرك 1.00986.1000

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Human Neural Stem Cells3D CulturePorous ScaffoldLaminin CoatingGrowth Factor Free MediumNeural Progenitor CellsCell MigrationMultidirectional GrowthScaffold RehydrationMedium Replacement

Related Articles