مقالة منهجية

تمييز الخلايا الجذعية العصبية البشرية إلى ثقافة ثلاثية الأبعاد باستخدام سقالة مسامية

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Stevanato، L. et al.، تمايز خط الخلايا الجذعية العصبية البشرية على الثقافات ثلاثية الأبعاد ، وتحليل الحمض النووي الريبي الصغير والجينات المستهدفة المفترضة. J. Vis. Exp. (2015)

يعرض هذا الفيديو تطور وتمايز الخلايا الجذعية العصبية البشرية داخل سقالة ثلاثية الأبعاد. يعزز طلاء اللامينين على السقالة ارتباط الخلية ، بينما يحفز الوسط العصبي الخالي من عامل النمو تمايز الخلايا إلى خلايا سلفية عصبية ، والتي توسع عملياتها داخل بنية مسامية في اتجاهات متعددة ، وتشكل ثقافة ثلاثية الأبعاد

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_title" >1. تمايز HNSC على ثقافة ثلاثية الأبعاد (3D)

< p class = "jove_content" >ملاحظة: عزل واستخلاص الخلايا الجذعية العصبية البشرية (hNSCs) من نسيج معتمد أخلاقيا موصوف في منشور سابق. يرجى اتباع الإرشادات الأخلاقية والمؤسسية أثناء اتباع هذا الإجراء.

  1. ثقافة 3D باستخدام لوحة 12 بئر
    1. استخدم تقنية معقمة طوال العملية. في خزانة السلامة البيولوجية ، أعد ترطيب السقالات بإضافة 2 مل / بئر من 70٪ من الإيثانول المحضر باستخدام مياه الري (WFIr). تجنب لمس السقالات عن طريق توزيع 70٪ من الإيثانول أسفل جدار كل بئر.
    2. استنشق الإيثانول بنسبة 70٪ بعناية واغسل السقالات على الفور ب 2 مل / بئر Dulbecco's Modified Eagle Medium F12 (DMEM: F12) لمدة 1 دقيقة. كرر إجراء الغسيل مرتين. استنشق بعناية DMEM: F12 بعد الغسيل النهائي.
    3. قم بتغطية السقالات بإضافة 2 مل / بئر من اللامينين (10 ميكروغرام / مل) في DMEM: F12. احتضان اللوحة عند 37 درجة مئوية في حاضنة مرطبة بنسبة 5٪ ثاني أكسيد الكربون2 لمدة ساعتين على الأقل. اغسل الطبق ب DMEM الدافئ: F12.
    4. قم بزرع كل سقالة بحوالي 500,000 hNSCs بحجم 150 ميكرولتر من RMM + عوامل النمو (GFs).
    5. احتضان اللوحة لمدة 3 ساعات عند 37 درجة مئوية في حاضنة مرطبة بنسبة 5٪ ثاني أكسيد الكربون2 للسماح للخلايا بالاستقرار في السقالات.
    6. أضف 3.5 مل من RMM إلى كل بئر ، مع الحرص على عدم إزاحة الخلايا من السقالات.
    7. احتضان الطبق لمدة 7 أيام ؛ استبدل وسط RMM (3.5 مل / بئر) بعد يوم واحد (التغذية الأولى) ومرة أخرى بعد 2-3 أيام من الرضاعة الأولى.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات DMEM: F12 إنفيتروجين هاتف: 21331-020 لإعداد متوسط RMM محلول الألبومين البشري باكستر للرعاية الصحية المحدودة 1501052 لوسط RMM المستخدم بتركيز نهائي قدره 0.03٪ ترانسفرين ، مؤتلف بشري سيغما تي 8158 بالنسبة لوسط RMM المستخدم بتركيز نهائي قدره 5 ميكروغرام / مل بوتريسين ثنائي حمض الهيدروكلوريد سيغما ص 5780 بالنسبة لوسط RMM المستخدم بتركيز نهائي قدره 16.2 ميكروغرام/مل الأنسولين ، مؤتلف بشري سيغما I9278 بالنسبة لوسط RMM المستخدم بتركيز نهائي قدره 5 ميكروغرام / مل البروجسترون سيغما ص 6149 لوسط RMM المستخدم بتركيز نهائي قدره 60 نانوغرام / مل ل-جلوتامين إنفيتروجين 25030-24 لوسط RMM المستخدم بتركيز نهائي قدره 2 ملي مولار سيلينيت الصوديوم سيغما إس 9133 لوسط RMM المستخدم بتركيز نهائي قدره 40 نانوغرام / مل bFGF بيبروتك AF-100-15 يضاف إلى وسط RMM ، يستخدم بتركيز نهائي قدره 10 نانوغرام / مل EGF بيبروتك أف 100-188 يضاف إلى وسط RMM ، يستخدم بتركيز نهائي قدره 20 نانوغرام / مل 4-OHT سيغما H7904 يضاف إلى وسط RMM ، يستخدم بتركيز نهائي يبلغ 100 نانومتر لامينين AMS Biotech 3400-010-10 مياه الري باكستر للرعاية الصحية UKF7114 طبق Alvetex 12 جيدا Reinnervate المحدودة أفب002 ايثانول ميرك 1.00986.1000

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة