Method Article

توليد الخلايا العصبية الودية بعد العقدة من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Wu ، H. F. ، et al. التمايز الفعال للخلايا العصبية المتعاطفة بعد العقدة باستخدام الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات في ظل ظروف ثقافة خالية من المغذيات ومحددة كيميائيا. J. Vis. Exp. (2020).

< p class = "jove_content">يوضح هذا الفيديو طريقة في المختبر لتوليد الخلايا العصبية المتعاطفة بعد العقدة من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات (hPSCs). يتم تمايز hPSCs إلى خلايا قمة عصبية (NCCs) على دعم مصفوفة غشاء القاعدي باستخدام وسيط تمايز. ثم يتم فصل NCCs وتشكيلها في كرويات باستخدام وسيط تمايز آخر. أخيرا ، يتم تحويل الكرات إلى خلايا عصبية متعاطفة بعد العقدة باستخدام وسيط خلية عصبية متعاطفة.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_title" >1. إعداد لطلاء الأطباق وإعداد الوسائط وصيانة hPSC

  1. طلاء الطبق
    1. طلاء فيترونكتين (VTN)
      1. ضع قوارير VTN في حمام مائي 37 درجة مئوية حتى تذوب تماما ، ثم تخلط جيدا.
      2. بالنسبة لطبق بتري مقاس 100 مم ، امزج 7 مل من محلول ملحي مخزن بالفوسفات 1x (PBS) مع 0.5 مجم / مل VTN ، أضف محلول VTN إلى الطبق ، واحتضنه في درجة حرارة الغرفة (RT) لمدة 1 ساعة.
    2. طلاء مصفوفة الغشاء القاعدي
      1. قم بإذابة قوارير مصفوفة الغشاء القاعدي (انظر جدول المواد) على الجليد عند 4 درجات مئوية بين عشية وضحاها.
      2. للحصول على بئر واحد من صفيحة 6 آبار ، ام....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >figure-results-1
الشكل 1: تحريض NC. (أ) الجدول الزمني والعلاجات لتحريض NC من اليوم 0 إلى اليوم 10. (ب) تمت مراقبة مورفولوجيا وتشكيل نتوءات NC كل يومين بواسطة الفحص المجهري للمجال الساطع. تم تلطيخ الخلايا في كل نقطة زمنية بعد اليوم 2 بشكل مشترك ل AP2A (أحمر) و SOX10 (أخضر). تم تلطيخ جميع صور التألق المناعي باستخدام DAPI. تشير الأسهم الحمراء إلى هياكل التلال. (ج

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments أطباق زراعة الخلايا 100 مم صقر 353003 15 مل أنابيب زراعة الأنسجة المخروطية VWR / كورنينج 89039-664 24 بئر لوحات زراعة الأنسجة صقر 353047 24 بئر لوحات منخفضة جدا كورنينج 07 200 601 و 07 200 602 5٪ ثاني أكسيد الكربون2/20٪ O2 حاضنة زراعة الأنسجة ثيرمو فيشر / تقنيات الحياة هيراسيل فيوس 160i 50 مل أنابيب زراعة الأنسجة المخروطية VWR / كورنينج 89039-656 6 ألواح زراعة الأنسجة كوستار 3516 أكوتاز تقنيات خلايا الابتكار AT104500 حل تفكك الخلايا الجسم المضاد ل AP2a أبكام أب108311 المضيف: أرنب ؛ 1: 400 تخفيف الأجسام المضادة ل Ascl1 BD Pharmingen 556604 المضيف: الماوس IgG1 ؛ تخفيف 1: 200 الأجسام المضادة ل CD49D بيو ليجند 304313 المضيف: Mouse IgG1 ؛ 5 ميكرولتر / مليون خلية في حجم 100 ميكرولتر الجسم المضاد المضاد ل CD49D (النمط المتماثل) بيو ليجند 400125 المضيف: Mouse IgG1 ؛ 5 ميكرولتر / مليون خلية في حجم 100 ميكرولتر الجسم المضاد المضاد ل DAPI سيغما د9542 1: 1000 تخفيف الجسم المضاد ل DBH إيمونوستار هاتف: 22806 المضيف: أرنب ؛ تخفيف 1: 500 الأجسام المضادة ل GFP أبكام أب13970 المضيف: دجاج؛ 1: 1000 تخفيف الأجسام المضادة ل HOXC9 سانتا كروز التكنولوجيا الحيوية ع ع -365692 المضيف: الماوس IgG1 ؛ تخفيف 1: 100 الجسم المضاد ل NET1 ماب نيت 17-1 المضيف: الماوس ؛ 1: 1000 التخفيف الأجسام المضادة ل PRPH سانتا كروز التكنولوجيا الحيوية الفئة SC-377093/H0112 المضيف: الماوس IgG2a ؛ تخفيف 1: 200 الجسم المضاد ل SOX10 أبكام أب50839 المضيف: الماوس ؛ تخفيف 1: 100 الأجسام المضادة المضادة ل TH بيل فريز ص 40101 - 150 المضيف: أرنب ؛ تخفيف 1: 500 حمض الأسكوربيك سيغما أ 8960-5 جي تركيز المخزون: 100 ملي مكمل B27 ثيرمو فيشر / تقنيات الحياة هاتف: 12587-010 تركيز المخزون: 50x BDNF أنظمة البحث والتطوير 248-دينار بحريني تركيز المخزون: 10 ميكروغرام / مل BMP4 أنظمة البحث والتطوير 314-BP تركيز المخزون: 6 ملم عداد الخلية ثيرمو فيشر / تقنيات الحياة الكونتيسة الثانية شرائح غرفة عد الخلايا إنفيتروجين ج 10312 الطرد المركزي إيبندورف 57021 و 5424 ص CHIR99021 أنظمة البحث والتطوير 4423 تركيز المخزون: 6 ملم قارورة التبريد ثيرمو فيشر / تقنيات الحياة 375353 ديسيبل أمبير سيغما د0627 تركيز المخزون: 100 ملي DMEM ثيرمو فيشر / تقنيات الحياة 10829-018 تركيز المخزون: 1x DMEM / F12 ثيرمو فيشر / تقنيات الحياة هاتف: 11330-057 تركيز المخزون: 1x DMSO ثيرمو فيشر / تقنيات الحياة بي ت 231-100 E6 متوسط جيبكو أ15165-01 E8 متوسط جيبكو أ15169-01 تركيز المخزون: 1x ملحق E8 جيبكو أ15171-01 تركيز المخزون: 50x EDTA سيغما ED2SS تركيز المخزون: 0.5 م آلة FACS بيكمان كولتر CytoFLEX (ل FACS) آلة FACS بيكمان كولتر MoFlo Astrios EQ (للفرز) أنابيب FACS (غطاء مرشح أزرق) صقر 352235 أنابيب FACS (غطاء أبيض) صقر 352063 مصل الأبقار الجنينية (FBS) أتلانتا بيولوجيكس S11150 GDNF بيبروتك 450 ريال تركيز المخزون: 10 ميكروغرام / مل جيلتريكس إنفيتروجين A1413202 مصفوفة الغشاء القاعدي تركيز المخزون: 100x hPSCs طومسون وآخرون ، (1998) وا09 hPSCs أوه وآخرون (2016) H9-PHOX2B :: eGFP فيبرونيكتين بشري (FN) VWR / كورنينج هاتف: 47743-654 تركيز المخزون: 1 مجم / مل ل-جلوتامين ثيرمو فيشر / جيبكو هاتف: 25030-081 تركيز المخزون: 200 ملي خزان LN أنظمة بيوجينيك مخصصة V-1500AB لامينين الفأر الأول (LM) أنظمة البحث والتطوير 3400-010-01 تركيز المخزون: 1 مجم / مل مكمل N2 ثيرمو فيشر / تقنيات الحياة 17502-048 تركيز المخزون: 100x الوسط العصبي القاعدي جيبكو هاتف: 21103-049 تركيز المخزون: 1x NGF بيبروتك 450-01 تركيز المخزون: 25 ميكروغرام / مل محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) جيبكو 14190-136 تركيز المخزون: 1x بولي إل أورنيثين هيدروبروميد (PO) سيغما ص 3655 تركيز المخزون: 15 مجم / مل بريموسين (مضادات حيوية) إنفيفوجين ANTPM1 تركيز المخزون: 50 مجم / مل آلة qPCR مختبرات بيو راد C1000 اللمس لوحات qPCR مختبرات بيو راد HSP9601 المؤتلف FGF2 أنظمة البحث والتطوير 233-FB / CF تركيز المخزون: 10 ميكروغرام / مل حمض الريتينويك سيغما R2625 تركيز المخزون: 1 ملي SB431542 أنظمة Tocris / R & D 1614 تركيز المخزون: 10 ملم تريبان بلو كورنينج MT-25-900-CI فيترونكتين (VTN) ثيرمو فيشر / تقنيات الحياة أ 14700 تركيز المخزون: 0.5 مجم / مل حمام مائي VWR / كورنينج 706308 Y27632 أنظمة البحث والتطوير 1254 تركيز المخزون: 10 ملم

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Human Pluripotent Stem CellsNeural Crest CellsSympathetic Neuron DifferentiationBasement Membrane MatrixSpheroid FormationRetinoic Acid TreatmentNeural Progenitor CellsPeripheral Nervous SystemCell Culture IncubatorEDTA Dissociation

Related Articles