Method Article

توليد الوصلات العصبية العضلية باستخدام جهاز الموائع الدقيقة

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Stoklund Dittlau ، K. et al. ، جيل الوحدات الحركية البشرية ذات الوصلات العصبية العضلية الوظيفية في أجهزة الموائع الدقيقة.J. Vis. Exp. (2021)

يوضح الفيديو تكوين الوصلات العصبية العضلية باستخدام جهاز ميكروفلويديك. يتم زرع الخلايا السليفة العصبية والخلايا السلفية العضلية في آبار مختلفة داخل الجهاز وتترك لتنضج في الخلايا العصبية الحركية والأنابيب العضلية ، على التوالي. يؤدي إنشاء حجم وتدرج كيميائي إلى تطوير الوصلات العصبية العضلية النشطة.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تنفيذ جميع الإجراءات التي تنطوي على جمع العينات وفقا لإرشادات IRB الخاصة بالمعهد.

جميع الكواشف والمعدات المستخدمة في هذا البروتوكول مدرجة في جدول المواد ويجب استخدامها معقمة. يجب تسخين الوسائط إلى درجة حرارة الغرفة (RT) قبل الاستخدام ما لم ينص على خلاف ذلك. للحصول على نظرة عامة على بروتوكول الثقافة المشتركة ، يرجى الاطلاع على الشكل 1.

< ص الفئة = "jove_title">1. تمايز أسلاف الخلايا العصبية الحركية من الخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات (iPSCs)

  1. اتبع بروتوكول تمايز الخلايا العصبية الحركية ، المقتبس من دراسة سابقة ، حتى الوصول إلى حالة السلف العصبي في اليوم 10 (N....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
الشكل 1: نظرة عامة تخطيطية على بروتوكول الوحدة الحركية في أجهزة الموائع الدقيقة.الجدول الزمني للتمايز ونظرة عامة على الثقافة المشتركة من اليوم 0 إلى اليوم 28 وفقا للجدول الزمني لبروتوكول تمايز الخلايا العصبية الحركية. يبدأ تمايز الخلايا العصبية الحركية من iPSCs في اليوم 0 ويتم إجراؤه كما هو مذكور سابقا لمدة 10 أيام تالية. في اليوم 9 ، يتم تعقيم الجهاز وتغطيته ب PLO-laminin. يتم إذابة MABs للتوسع في ق.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments حمض الخليك كيم لاب نيفادا CL00.0116.1000 مكون الطلاء. H226 ، H314. ص 280 Agrin (بروتين بشري مؤتلف) أنظمة البحث والتطوير 6624-AG-050 ملحق وسائط الإعلام حمض الأسكوربيك سيغما أ 4403 مكون الوسائط βIII-توبولين (توبولين) أبكام أب7751 الأجسام المضادة (1:500) β ميركابتو إيثانول ثيرمو فيشر العلمي 31350010 مكون الوسائط. H317. ص 280. ب 27 بدون فيتامين أ ثيرمو فيشر العلمي هاتف: 12587-010 مكون الوسائط BDNF (عامل التغذية العصبية المشتق من الدماغ) بيبروتك 450-02 ب عامل النمو bFGF (عامل نمو الخلايا الليفية الأساسية المؤتلفة البشرية) بيبروتك 100-18 ب عامل النمو الكولاجين من جلد العجل ثيرمو فيشر العلمي 17104019 مكون الطلاء CNTF (عامل التغذية العصبية الهدبي) بيبروتك 450-13 ب عامل النمو DAPT توكريس بيوساينس 2634 ملحق وسائط الإعلام DMEM / F12 ثيرمو فيشر العلمي 11330032 مكون الوسائط DMSO سيغما D2650-100 مل مكون الحفظ بالتبريد. H315 ، H319 ، H335. ص 280. محلول ملحي مخزن بالفوسفات من Dulbecco (DPBS) ثيرمو فيشر العلمي 14190250 خال من الكالسيوم ولا المغنيسيوم ايثانول VWR 20.821.296 تعقيم. H225. ص 280 مصل الأبقار الجنينية ثيرمو فيشر العلمي 10270106 مكون الوسائط وسط تركيب التألق داكو S3023 مكون الكيمياء المناعية GDNF (عامل التغذية العصبية المشتق من خط الخلايا الدبقية) بيبروتك 450-10 ب عامل النمو مصل الحصان ثيرمو فيشر العلمي 16050122 مكون الوسائط IMDM ثيرمو فيشر العلمي 12440053 مكون الوسائط ترانسفيرين الأنسولين السيلينيوم ثيرمو فيشر العلمي 41400045 مكون الوسائط استبدال مصل الضربة القاضية ثيرمو فيشر العلمي هاتف: 10828-028 مكون الحفظ بالتبريد Laminin من Engelbreth-Holm-Swarm غشاء القاعدي لساركوما الفئران سيغما L2020-1MG مكون الطلاء وملحق الوسائط ل-جلوتامين ثيرمو فيشر العلمي 25030-024 مكون الوسائط مكمل N-2 ثيرمو فيشر العلمي 17502-048 مكون الوسائط الوسط العصبي القاعدي ثيرمو فيشر العلمي 21103049 مكون الطلاء والوسائط الأحماض الأمينية غير الأساسية ثيرمو فيشر العلمي 11140050 مكون الوسائط بارافيلم م سيغما P7793-1EA معدات التخزين البنسلين / الستربتومايسين (5000 وحدة / مل) ثيرمو فيشر العلمي 15070063 مكون الوسائط صحن بتري (3 سم) نونك 153066 قطر الدائرة: 3 سم صحن بتري (10 سم) سارستيدت 833.902 دولار القطر: 10 سم طبق (6 آبار) سيلستار غرينر بيو ون 657160 لوحة الثقافة بولي إل أورنيثين (PLO) سيغما P3655-100 ملغ مكون الطلاء حمض الريتينويك سيغما R2625 ملحق الوسائط. H302 ، H315 ، H360FD ، H410. ص 280. مكمل خلية ريفيتا ثيرمو فيشر العلمي A2644501 محلول مثبط الصخور ناهض ناعم ميرش ميليبور 566660 ملحق وسائط الإعلام بيروفات الصوديوم تقنيات الحياة هاتف: 11360-070 مكون الوسائط قارورة T75 سيغما CLS3276 لوحة الثقافة تريب إل إكسبريس ثيرمو فيشر العلمي 12605010 حل تفكك MAB توبوسيرارین هيدروكلوريد خماسي هيدرات سيغما تي 2379-100 جرام حاصرات مستقبلات أستيل كولين. H301. ص 280. جهاز الموائع الدقيقة المجمعة مسبقا من XonaChips Xona Microfluidics فولكس XC150 طول Microgroove: 150 ميكرومتر

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Neuromuscular JunctionsMicrofluidic DeviceNeural Progenitor CellsMuscle Progenitor CellsMotor NeuronsMyotubesMicrogroovesCell SeedingGrowth MediumDifferentiation Medium

Related Articles