عزل وثقافة الخلايا العصبية الأولية والدبقية من المثانة البولية للفئران

الملخص

المصدر: Wang، R. et al.، عزل وثقافة الخلايا العصبية الأولية والخلايا الدبقية من المثانة البولية للفئران البالغة. J. Vis. Exp. (2020).

يوضح هذا الفيديو تقنية لتوليد ثقافة أولية للخلايا العصبية والخلايا الدبقية من المثانة البولية للفئران. يحدد الخطوات المتبعة في تحضير الأنسجة ، والهضم الأنزيمي للحصول على خلايا مفردة ، وزراعة الخلايا في وسط خاص بالخلايا العصبية لإنشاء ثقافة عصبية ودبقية أولية.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. تحضير المواد

1. تعقيم جميع الأدوات و ddH₂O باستخدام الأوتوكلاف قبل إجراء التجربة. تشمل الأدوات على سبيل المثال لا الحصر المقص الجراحي ، ومقص العيون ، والملقط ، ومقسم نواة الملاعق ، والأطباق الزجاجية (قطرها 60-100 مم) ، والأكواب الزجاجية.
2. تحضير محلول كريبس (الجدول 1): قم بإذابة جميع المواد الكيميائية باستخدام ddH₂O قبل الاستخدام. قم بإذابة CaCI₂ بشكل منفصل وأضفه ببطء إلى المحلول المختلط مع التقليب لتجنب الرواسب.
3. تحضير و....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 0.25٪ تربسين جيبيكو 15050065 هضم الإنزيم 48 بئر لوحة ثقافة كورنينج 3548 طبق طلاء مضاد حيوي / مضاد للفطريات جيبيكو 15240062 وسائط الثقافة / وسائط الشطف ب -27 جيبيكو 17504044 الإعلام الثقافي الكسر الخامس BSA جيبيكو 332 ريال هضم الإنزيم حاضنة ثاني أكسيد الكربون₂ هيريوس B16UU زراعة الخلايا الكولاجيناز النوع الثاني سيغما 2593923 هضم الإنزيم DMEM / F-12 جيبيكو 11330032 شطف الوسائط مصل الأبقار الجنينية جيبيكو 10100147 وسائط الثقافة / وسائط الشطف ملقط شنغهاي جين تشونغ الأجهزة الطبية 1383 10 سم ؛ عملية معقمة أكواب زجاجية أجهزة هوان تشيو الطبية 1101 50 مل عملية معقمة أغطية زجاجية WHB العلمية دبليو إتش بي -48-سي إس طبق طلاء أطباق زجاجية أجهزة هوان تشيو الطبية 1177 [1177] [م] 100 مم ؛ عملية معقمة مقعد التدفق الصفحي سو جي للأجهزة الطبية سي بي 1400 فولت عملية معقمة الفئران GDNF بيبروتك AF45044 الإعلام الثقافي Neurobasal-A وسط جيبيكو 10888022 الإعلام الثقافي مقص العيون شنغهاي جين تشونغ الأجهزة الطبية J21010 12.5 سم ؛ عملية معقمة الماصات إيبندورف 3120000240 100-1000 ul ؛ الكاشف والعينة الماصة الماصات إيبندورف 3120000267 10-100 ul ؛ الكاشف والعينة الماصة بولي دي ليسين سيغما P7280 طبق طلاء أجهزة الطرد المركزي المبردة أداة مروحة بينغ TGL-16A هضم الإنزيم حاضنة الاهتزاز أدوات مختبر هايمن كيلين بيل تي 8-1 هضم الإنزيم ملاعق مقسم النواة شنغهاي جين تشونغ الأجهزة الطبية يزار 030 12 سم ؛ عملية معقمة مقص جراحي شنغهاي جين تشونغ الأجهزة الطبية J21130 16 سم ؛ عملية معقمة منشفة جراحية فو كانغ الأجهزة الطبية 5002 40 × 50 سم ؛ عملية معقمة لامينين سيغما L2020 طبق طلاء ل-جلوتامين جيبيكو 25030081 الإعلام الثقافي