تحضير أقسام الدماغ باستخدام طريقة التعافي الوقائية القائمة على NMDG

الملخص

المصدر: Ting، J. T. et al. تحضير شرائح الدماغ الحادة باستخدام طريقة استعادة وقائية محسنة من N-Methyl-D-glucamine. J. Vis. Exp. (2018).

يصف هذا الفيديو بروتوكولا للحصول على شرائح الدماغ باستخدام طريقة الاسترداد الوقائية القائمة على N-Methyl-D-glucamine (NMDG). يتم تحضين الدماغ المقطوع في aCSF مع NMDG و HEPES لتقليل موت الخلايا العصبية وتلفها أثناء التقسيم. يسمح للقسم بالتعافي في aCSF لاستعادة الأنشطة الخلوية

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. تشريح الدماغ والتقطيع

1. قطع رأس. استخدم مشرطا لفتح الجلد على الرأس وفضح غطاء الجمجمة.
2. استخدم مقصا فائق القطع لقطع الجلد فوق غطاء الجمجمة وعمل شقوق صغيرة بشكل جانبي على كلا الجانبين عند القاعدة الذيلية / البطنية للجمجمة. قم بعمل جروح ضحلة إضافية بدءا من الجانب الذيلي / الظهري للجمجمة ، وتحرك في الاتجاه المنقاري أعلى خط الوسط الظهري مع الحرص على عدم إتلاف الدماغ الأساسي. قم بعمل قطع نهائي "T" عموديا على خط الوسط على مستوى المصابيح الشمية.
   ملاحظه: يجب توخي الحذر لضمان عدم حدوث ضرر لمنطقة (مناطق) الدماغ ذات الاهتمام. على وجه الخصوص ، لا ينبغي أن يكون هناك أي قوة ضغط تطبق على الدماغ نفسه.
3. استخدم....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات ضغط VF-200 الأدوات الدقيقة في إف -200 قطاعة الأنسجة الاهتزازية (موصى به) ن-ميثيل-د-جلوكامين سيجما ألدريتش M2004 مكون aCSF كلوريد الصوديوم سيجما ألدريتش S3014 مكون aCSF كلوريد البوتاسيوم سيجما ألدريتش ص 5405 مكون aCSF فوسفات الصوديوم أحادي القاعدة ثنائي الهيدرات سيجما ألدريتش 71505 مكون aCSF بيكربونات الصوديوم سيجما ألدريتش الطراز S5761 مكون aCSF هيبس سيجما ألدريتش إتش 4034 مكون aCSF الجلوكوز سيجما ألدريتش جي 7021 مكون aCSF أسكوربات الصوديوم سيجما ألدريتش أ 4034 مكون aCSF ثيوريا سيجما ألدريتش تي 8656 مكون aCSF بيروفات الصوديوم سيجما ألدريتش ص 5280 مكون aCSF ثنائي هيدرات كلوريد الكالسيوم سيجما ألدريتش [ك7902] مكون aCSF كبريتات المغنيسيوم هيبتاهيدرات سيجما ألدريتش M1880 مكون aCSF ملقط حاد منحني أدوات العلوم الدقيقة 11065-07 أدوات تشريح الدماغ مقص تشريح دقيق (supercut) أدوات العلوم الدقيقة 14058-09 أدوات تشريح الدماغ مقص كبير شديد التحمل 7 بوصة أدوات العلوم الدقيقة 14000-18 أدوات تشريح الدماغ ملعقة معدنية سيجما ألدريتش Z511455-1باك أدوات تشريح الدماغ شفرات الحلاقه VWR 89031-954 أدوات تشريح الدماغ حافظ شرائح الدماغ -4 أتمتة العلمية إس بي إس كي4 غرفة عقد شريحة الدماغ النايلون المعاوضة وارنر إنسترومنتس 64-0198 لبناء غرف استرداد شرائح صغيرة أكواب زجاجية من بيركس (250 مل) VWR 89090-434 لبناء غرف استرداد شرائح صغيرة طبق بلاستيكي 35 مم دائري VWR هاتف: 100488-376 لبناء غرف استرداد شرائح صغيرة أحجار ناشر الغاز (10 ميكرومتر) سيجما ألدريتش 59277 للكربوجين المستمر (الفقاعات الدقيقة) نوع الاغاروز I-B سيجما ألدريتش أ 0576 لتضمين عينات الدماغ حمض الهيدروكلوريك سيجما ألدريتش H1758-100 مل لتعديل درجة الحموضة للوسائط هيدروكسيد الصوديوم سيجما ألدريتش 221465-25 جرام لتعديل درجة الحموضة للوسائط هيدروكسيد البوتاسيوم سيجما ألدريتش 221473 لتعديل درجة الحموضة للوسائط ماصات نقل البلاستيك 3 مل متدرجة VWR 89497-676 لنقل الشرائح شفرات حاقن سيراميك الزركونيوم شفرات الإيقاع المتخصصة إف - إنز 10 http://cadenceinc.com/ حمام مائي ساخن (2.5 لتر) VWR هاتف: 13491-060 متنوعه جولات ورق الترشيح VWR هاتف: 28456-022 متنوعه الغراء سيانواكريليت الامازون B000BQRBO6 متنوعه طبق بتري زجاجي VWR 89000-326 متنوعه 10X محلول ملحي مخزن بالفوسفات سيجما ألدريتش ص 5493 متنوعه خلاط حراري (مع كتلة أنبوب 1.5 مل) VWR 89232-908 للحفاظ على الاغاروز منصهرة