توليد الغلاف الفلكي وصيانته باستخدام الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات

الملخص

المصدر: Cvetkovic، C.، et al. نمذجة الدوائر الدقيقة المشبكية مع الثقافات المشتركة ثلاثية الأبعاد للخلايا النجمية والخلايا العصبية من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات. J. Vis. Exp. (2018).

يوضح الفيديو طريقة لتوليد الغلاف الفلكي من أسلاف الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات. إنه ينطوي على نمو وتكاثر الخلايا الجذعية بوسط مغذي يحتوي على عوامل نمو ومثبطات كيناز. ثم تتجمع هذه الخلايا وتتمايز إلى خلايا نجمية ، وتشكل الغلاف الفلكي.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. زراعة الخلايا وإعداد الكاشف

1. تحضير الألواح المطلية لزراعة الخلايا.
   قم
   1. بتخفيف محلول طلاء المصفوفة خارج الخلية (ECM) بوسائط DMEM / F12 لتحضير محلول مخزون 1 مجم / مل. قم بتخزين محلول مخزون ECM المخفف في 30 أنبوبا مخروطيا سعة كل منها 3 مل وخزنها على الفور في -20 درجة مئوية. للحصول على حل عملي، أعد تعليق 3 مل من مخزون ECM إلى 33 مل من وسائط DMEM/F12 المبردة مسبقا، ليصل الحجم الإجمالي إلى 36 مل بتركيز 80 ميكروغرام/مل.
   2. قم بتغطية 1 مل لكل بئر من لوحة زراعة الخلايا المكونة من 6 آبار باستخدام محلول عمل ECM. أضف 1 مل إضافي من DMEM / F12 لكل بئر (إذا لزم الأمر) لضمان تغطية سطح البئر بالكامل. اسمح لألواح زراعة الخلايا المطل....

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1: تصوير تدريجي للتمايز وتشكيل المجالات العصبية ثلاثية الأبعاد المشتقة من hPSCs. (أ) الجدول الزمني للخطوات الرئيسية في البروتوكول. (ب) يمكن إنشاء مجموعات نقية من الخلايا العصبية من الخلايا الجذعية متعددة القدرات المستحثة البشرية (hPSCs). لتوليد أسلاف الخلايا النجمية (الصندوق الأخضر المنقط) ، انظر الخطوة 2.1. (ج) الخلايا العصبية المحفزة (iNeurons ؛ انظر القسم 2.2) التي تم إنشاؤها من h.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 6 صحن بئر فيشر ساينتيك 08-772-1 ب 15 مل أنابيب مخروطية الشكل أوليمبوس بلاستيك 28-101 أكوتاز سيغما A6964-100 مل حل الانفصال لوحة AggreWell تقنيات الخلايا الجذعية 34850 محلول شطف مضاد للالتصاق تقنيات الخلايا الجذعية 7010 منع التصاق الخلايا بألواح الميكروويل مضاد / مضاد ثيرموفيشر 15240062 ب 27 ثيرموفيشر 17504044 ملحق الوسائط الوسط العصبي BrainPhys تقنيات الخلايا الجذعية 5790 بديل الوسط القاعدي العصبي نادد CS10 تقنيات الخلايا الجذعية 7930 وسيط الحفظ بالتبريد مع 10٪ DMSO DMEM / F12 ثيرموفيشر هاتف: 10565-042 مع مكمل GlutaMAX DMH-1 تقنيات الخلايا الجذعية 73634 خطر: سام إذا ابتلع. تركيز العمل: 2 ميكرومتر دوكسيسيكلين هيدروكلوريد (دوكس) سيغما D3072-1 مل خطر: سام للنساء الحوامل. تركيز العمل: 2 ميكروغرام / مل عامل نمو البشرة (EGF) بيبروتك AF-100-15 تركيز العمل: 10 نانوغرام / مل عامل نمو الخلايا الليفية -2 (FGF) بيبروتك 100-18 ب تركيز العمل: 10 نانوغرام / مل مقياس الدم أو عداد الخلايا الأوتوماتيكي تقنيات الحياة AMQAX1000 مصفوفة غشاء Matrigel كورنينج 354230 حل طلاء ECM. تركيز العمل: 80 ميكروغرام / مل. استعد على الثلج وتأكد من تبريد الماصات والأنابيب والوسائط مسبقا. حل التركيب N2 ثيرموفيشر 17502048 ملحق الوسائط محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) تقنيات الخلايا الجذعية CA008-300 ريلير إس آر تقنيات الخلايا الجذعية 5872 كاشف الانفصال والمرور مثبط Rho-Kinase Y27632- (Y) توكرس 1254 تركيز العمل: 10 ميكرومتر SB431542 تقنيات الخلايا الجذعية 72234 تركيز العمل: 2 ميكرومتر قارورة ثقافة T25 أوليمبوس بلاستيك 25-207 قبعات ذات فتحات تهوية قارورة ثقافة T75 أوليمبوس بلاستيك 25-209 قبعات ذات فتحات تهوية