تطوير نموذج ثلاثي الأبعاد قائم على الحرير والكولاجين للأنسجة العصبية المستقطبة

الملخص

المصدر: Chwalek، K. et al.، نموذج ثلاثي الأبعاد قائم على الكولاجين الحريري للأنسجة العصبية المستقطبة.J. Vis. إكسب. (2015).

يعرض هذا الفيديو إنشاء نموذج نسيج عصبي مستقطب ثلاثي الأبعاد باستخدام سقالات الكولاجين الحريرية. يفصل عملية بذر الخلايا العصبية على سقالات الحرير المسامية ، واحتضان ارتباط الخلية ، وتضمين السقالة بالكولاجين ، ويؤكد على أهمية مصفوفة الكولاجين الداعمة في تشكيل نموذج الأنسجة العصبية المستقطبة ثلاثية الأبعاد.

البروتوكول

تم تنفيذ جميع الإجراءات التي تنطوي على جمع العينات وفقا لإرشادات IRB الخاصة بالمعهد.

< p class = "jove_title" >1. تحضير سقالة الحرير

1. تحضير محلول الحرير من شرانق بومبيكس موري
   1. قطع كل شرنقة إلى 8 قطع متساوية باستخدام المقص. استخدم حوالي 11 شرانق مقابل 5 جم من الشرانق المجزأة. (15 دقيقة)
   2. تحضير 2 لتر من محلول 0.02 M Na₂CO₃ واتركه يغلي باستخدام طبق ساخن. (15 دقيقة)
   3. تزن 5 جم من الشرانق المجزأة وقم بغليها في محلول Na₂CO₃ لمدة 30 دقيقة. هذه الخطوة ، التي تسمى إزالة الصمغ ، تنقي فيبروين الحرير من البروتينات المحبة للماء ، السيريسين. (30 دقيقة)
   4. ....

النتائج

الشكل 1. قالب PTFE يستخدم لإعداد سقالة الإسفنج الحريري. الأبعاد: قطر 10 سم ، ارتفاع 2 سم.

< p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 2. 3D نموذج الأنسجة الشبيهة بالدماغ. (أ) سقالة إسفنجية حريرية مسامية. (ب) تلطيخ الخلايا العصبية الحية / الميتة في اليوم الأول .......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات جهاز طرد مركزي 5804 R إيبندورف بولي دي ليسين سيجما ألدريتش P6407-5 ملغ التركيز النهائي 10 ميكروغرام / مل مذاب في الماء الوسط العصبي القاعدي جيبكو 21103049 تسخين حتى 37 درجة مئوية قبل الاستخدام ملحق B27 50x جيبكو 17504-044 جلوتاماكس جيبكو 35050-061 بنسيلين ستربتومايسين كورنينج 30-002-CI الكولاجين الأول، ذيل الفئران، 100 ملغ كورنينج 354236 التركيز النهائي 3 مجم / مل هيدروكسيد الصوديوميوم سيجما ألدريتش S2770 تاكل برنامج تلفزيوني سيجما ألدريتش د1283-500 مل نا₂ثاني أكسيد الكربون₃ سيجما ألدريتش هاتف: 223530 ليبر سيجما ألدريتش 213225 MWCO 3500 كاسيت غسيل الكلى ثيرمو فيشر 66110 [م] لوحة التسخين فيشر ساينتيك إيزوتيمب غربال فيشر ساينتيك الرقم 270، الرقم 35، الرقم 30 PTFE قالب مصنوع في المنزل (الشكل 1) قطر 10 سم ، ارتفاع 2 سم كلوريد الصوديوم سيجما ألدريتش 71382 خزعة لكمة 5 مم أداة الدقة العالمية 501909 خزعة لكمة 2 مم أداة الدقة العالمية 501908 التربسين سيجما ألدريتش T4049-500 مل DNase روش 10104159001 التركيز النهائي 0.3٪ بروتين فول الصويا سيجما ألدريتش T6522-100 ملغ التركيز النهائي 1 مجم / مل