$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_title" >
1. تحريض الخلايا الجذعية العصبية
ملاحظة: اعتمادا على ظروف الخلية ، بعد حوالي 5 أو 7 أيام من التعدي ، ستصل الخلايا الملتصقة أحادية الطبقة إلى 30-50٪ من التقاء (الشكل 1 ج).
- قم بإزالة المواد الطافية التي تحتوي على خلايا وكرات عائمة ثم أضف 1 مل من وسط السلف العصبي (وسط النسر المعدل من Dulbecco: خليط المغذيات F-12 (DMEM / F12) ، الذي يحتوي على 1x N2 ، 0.1٪ (وزن / حجم) ألبومين مصل البقر (BSA) ، 1٪ (v / v) المضادات الحيوية ، 20 نانوغرام / مل من عامل نمو الخلايا الليفية الأساسي (bFGF) ، و 20 نانوغرام / مل من عامل نمو البشرة (EGF)) في الخلايا الملتصقة.
- اختياريا ، قم بفصل كرات الخلية عن طريق سحب الخلايا برفق وطرد مركزي للخلايا عند 170 × جم لمدة 10 دقائق. قم بإزالة المادة الطافية وإعادة تعليق الخلايا في 1 مل من وسط السلف العصبي في صفيحة جديدة مكونة من 24 بئرا مطلية ب matrigel لكل تعليمات كنسخة احتياطية.
- قم بتغيير الوسط كل يومين حتى تصل الخلايا إلى 60 - 80٪ ملتقى ، عادة بعد أسبوع واحد.
- تخلص من المادة الطافية وأضف 1 مل من وسط الخلايا الجذعية العصبية (وسط خال من المصل ، NSC SFM). قم بفصل الخلايا باستخدام مكشطة الخلايا ، متبوعة بسحب لطيف جدا.
- قم بإزالة الخلايا وبذرها جميعا في بئر واحد من طبق مكون من 6 آبار. أضف 1 مل أخرى من وسط الخلايا الجذعية العصبية لعمل وسائط 2 مل لكل بئر. احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية في حاضنة ثاني أكسيد الكربونبنسبة 5٪.
- قم بتغيير الوسيط كل يومين.
- عندما تصل الخلايا إلى التقاء 60٪ ، قم بفصل الخلايا وإعادة صفيحتها بنسبة 1: 3 باتباع الخطوات الواردة في 1.4 و 1.6.
