تفريق الخلايا السلفية العصبية المستحثة إلى خلايا نجمية

الملخص

المصدر: Meyer، S.، et al.، Edenhofer، F. اشتقاق الخلايا الليفية البشرية البالغة وتحويلها المباشر إلى خلايا سلفية عصبية قابلة للتوسيع. J. Vis. Exp. (2015)

يوضح هذا الفيديو عملية التفريق بين الخلايا السلفية العصبية المستحثة (iNPCs) إلى خلايا عصبية وخلايا نجمية باستخدام وسائط متخصصة.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. تمايز iNPCs

1. التمايز نحو النسب العصبية
   1. خلايا الثقافة على ألواح مغلفة باللون الموحد كما هو موضح أعلاه. قم بتغيير الوسائط إلى وسائط الانتشار العصبي (DMEM / F-12 ، 1x N2 ، 1x B27 ، 300 نانوغرام / مل cAMP ، 200 ميكرومتر فيتامين C ، 10 نانوغرام / مل BDNF ، 10 نانوغرام / مل GDNF) عندما تكون الخلايا ملتقية بنسبة 70٪ تقريبا. قم بتغيير الوسائط كل يومين لمدة ثلاثة أسابيع. لا تقم بتقسيم الخلايا أثناء التمايز.
   2. بعد ثلاثة أسابيع ، يجب أن تعبر الخلايا عن العلامة العصبية TUJ1. لاكتساب المزيد من الخلايا العصبية والأنواع الفرعية العصبية الناضجة ، استمر في التمايز لمدة تصل إلى 3 أشهر.
2. التمايز نحو النسب الدبقي
   1. قم بتغيير الوسائط إلى وسائط الحث الدبقي (1: 1 DMEM / F-12: عصبي قاعدي ، 1x N2 ، 1x B27 ، 10 ميكرومتر β-ميركابتو إيثانول ، 100 ميكرومتر من الأحماض الأمينية غير الأساسية ، 1.5 ملي مولار L-Glutamine ، 5 ميكروغرام / مل أنسولين ، 40 نانوغرام / مل T3) بما في ذلك 20 نانوغرام / مل EGF للحث على التمايز في خلايا السلائف الدبقية. قم بإزالة نصف الوسائط واستبدلها بوسائط جديدة كل يومين لمدة أسبوعين تقريبا. خلال هذه الفترة ، يجب تقسيم الخلايا 1: 3 في وجود مثبط ROCK 10 ميكرومتر Y27632 عند الوصول إلى التقاء 100٪.
   2. بعد أسبوعين ، قم بتمايز الخلايا إلى الخلايا النجمية: عندما تكون الخلايا ملتقية تقريبا ، قم بتغيير الوسائط إلى وسائط الخلايا النجمية المتاحة تجاريا ، وقم بتغيير الوسائط كل يومين. بعد حوالي 7 أيام ، تبدأ الخلايا في التعبير عن علامات الخلايا النجمية (على سبيل المثال ، GFAP). إذا تلتقي الخلايا بنسبة 100٪ أثناء بروتوكول التمايز ، فقم بتقسيمها بنسبة 1: 2 في وجود مثبط ROCK 10 ميكرومتر Y27632.

المواد