تمايز الخلايا السلفية العصبية إلى خلايا عصبية

الملخص

المصدر: Mao, X., et al. التمايز العصبي من الخلايا الجذعية الجنينية للفأر في المختبر. J. Vis. Exp. (2020).

عرض الفيديو طريقة زراعة الخلايا لتمييز الخلايا السلفية العصبية إلى خلايا عصبية. عن طريق احتضان الخلايا في وسط غني بالمغذيات مكمل بعوامل النمو ، نضجت الخلايا السلفية إلى خلايا عصبية ذات محاور وتشعبات متطورة. يضمن عامل التثبيت بقاء الخلية وحمايته من التلف التأكسدي طوال عملية التمايز.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. التمايز من الشخصيات غير القابلة للعب إلى الخلايا العصبية (المرحلة الثانية)

1. قم بزرع حوالي 5 × 10⁵ خلايا جذعية جنينية للفأر أو مشتقات mESC في حدود 2 مل من وسط التمايز القاعدي I لكل بئر على ألواح 6 آبار مطلية بالجيلاتين بنسبة 0.1٪. قسم مشتقات mESC بشكل عشوائي إلى 3 مجموعات ، مثل بروتوكول المرحلة الثانية 1 والبروتوكول 2 والبروتوكول 3 على التوالي.
2. ضع اللوحة في حاضنة ثاني أكسيد الكربون_{بنسبة 5٪ عند} 37 درجة مئوية للسماح بالتثبيت لمدة 6 ساعات. اغسلها مرتين باستخدام 2 مل من PBS.
3. أضف 2 مل من وسط التمايز القاعدي I و N2B27 المتوسط I و N2B27 الوسط II (الجدول 1) ، على التوالي ، لكل بئر من المجموعات المذكورة أعلاه.
4. ضع الألواح في الحاضنة واتركها تتمايز لمدة 10 أيام أخرى. قم بتغيير الوسيط المقابل كل يومين.
5. تحقق من حالة التمايز وسجل التغييرات المورفولوجية كما هو مذكور في الخطوة 3.
6. في اليوم 18 ، قم بتقييم توليد الخلايا العصبية (β-Tubulin III إيجابي) وحدد كفاءة التمايز للبروتوكولات الثلاثة المستخدمة في الخطوة 4.

النتائج

الجدول 1: تفاصيل البروتوكولات الثلاثة المستخدمة في تمايز المرحلة الثانية.

المرحلة الثانية من التمايز (10 د) البروتوكولات وسائط البروتوكول 1 تمايز طبيعيا: مع تمايز قاعدية وسط أنا فقط وسيط التمايز القاعدي I: DMEM...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات الجسم المضاد المضاد β-Tubulin III المنتج في الأرانب سيجما ألدريتش تي 2200 تخزينها عند -80 درجة مئوية ، وتجنب التجميد والذوبان المتكرر مكمل B-27 (50X) ، خال من المصل جيبكو 17504044 مخزنة في -20 درجة مئوية ، وتحمي من الضوء DME / F-12 1: 1 (1x) HyClone SH30023.01 مليار مخزنة في 4 درجات مئوية مصل الأبقار الجنينية HyClone SH30084.03 تخزينها عند -20 درجة مئوية ، وتجنب التجميد والذوبان المتكرر الفحص المجهري الفلوري أوليمبوس CKX53 الجيلاتين جيبكو CM0635B مخزنة في درجة حرارة الغرفة مكمل GlutaMAX جيبكو 35050061 مخزنة في 4 درجات مئوية Immunol Staining المخزن المؤقت لتخفيف الأجسام المضادة الأولية بيوتيم P0103 مخزنة في 4 درجات مئوية خروج المغلوب DMEM / F-12 جيبكو 12660012 مخزنة في 4 درجات مئوية محلول الأحماض الأمينية غير الأساسية MEM جيبكو 11140076 مخزنة في 4 درجات مئوية ملحق N-2 (100X) جيبكو 17502048 يتم تخزينها في -20 درجة مئوية والحماية من الضوء مصل الماعز العادي جاكسن 005-000-121 مخزنة في -20 درجة مئوية الوسط العصبي القاعدي جيبكو 21103049 مخزنة في 4 درجات مئوية طبق بكتيري غير لاصق كورنينج 3262 ريال محلول ملحي مخزن بالفوسفات (1X) HyClone SH30256.01 مليار مخزنة في 4 درجات مئوية محلول البنسلين / الستربتومايسين HyClone SV30010 مخزنة في 4 درجات مئوية PD0325901(ميردامتينيب) سيليك S1036 مخزنة في -20 درجة مئوية حمض الريتينويك سيغما R2625 يتم تخزينها في درجة حرارة -80 درجة مئوية والحماية من الضوء سلالة 129 الخلايا الجذعية الجنينية للفأر سياجن MUAES-01001 يتم صيانتها في نظام الاستزراع الخالي من التغذية 2-ميركابتو إيثانول جيبكو 21985023 يتم تخزينها في درجة حرارة 4 درجات مئوية وتحمي من الضوء 4٪ بارافورمالديهايد بيوتيم P0098 مخزنة في -20 درجة مئوية 6 - لوحة البئر كورنينج 3516 طبق ثقافة خلية 60 مم كورنينج 430166 أنبوب طرد مركزي 15 مل NUNC 339650